山东脐血库3000份脐带血处理保存的操作程序.pdf

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1、中国实验血液学杂志JournalofExperimentalHematology2001;9(2)·153·山东脐血库3000份脐带血处理保存的操作程序周胜利　　沈柏钧　　阎文瑛　　旭　日　　潘　杰　　马秀峰　宋道刚(山东脐血造血干细胞中心　　济南　250002)摘要　　大量的实验和临床资料表明,脐带血干细胞移植可成功的用于造血干细胞重建。本文从3000份脐带血的采集、分离、浓缩、低温保存、融化和各种检测等方面的经验,阐述如何在我国建立符合cGMP要求的高质量脐带血造血干细胞库。采用密闭式收集的脐带血和羟乙基淀粉(HES)混

2、合,浓缩有核白细胞,经过微生物及组织配型(HLA)检测后,以液氮深低温保存供临床应用。贮9+6存脐带血平均有核细胞(NC)总数为(1.2±0.6)×10,CD34细胞为(3.0±3.7)×10,CFU2GM66为(1.1±0.7)×10,CFU2GEMM为(1.1±1.2)×10,回收率分别为91%,88%,85%和82%。红细胞和血红蛋白的回收率平均为(39±9)%和(40±8)%,平均贮存体积为(35.1±7.1)ml。从脐带血收集到分离的平均时间为15小时,贮存前的脐带血活细胞比率大于95%,冻融后的活细胞比率大于92

3、%。单个核细胞,CD34阳性细胞和CFU2GM的回收率分别为96%,90%,和91%。所收集脐带血中,未发现有人免疫缺陷病毒抗体(HIVAb)阳性,梅毒阳性率为0.1%,乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性率为0.8%,乙型肝炎核心抗体(HBcAb)阳性率为3.2%,丙型肝炎抗体(HCVAb)阳性率为0.2%,母血巨细胞病毒(CMV)免疫学检测阳性率为87.1%,细菌污染率为1.2%,异常血红蛋白为0.1%。所贮存脐带血具有3个以上HLA位点和待查病人的相合机率为7100%,6个HLA位点完全相符的机率为5%。若病人所需最低N

4、C为2.7×10Pkg,则所存脐带血中有近50%可供体重为50公斤左右病人应用。以上资料表明:①在中国建立一座能保存2万份以上规模的脐带血库是必要的,也是可行的。②我们目前所采用的方法和程序能保证高质量而且资料齐全的脐带血供临床应用。③脐带血体积和单个核细胞数和造血干P祖细胞含量呈正相关,8仅收集体积大于60ml以及细胞数大于8×10的脐带血。+关键词　　脐带血　　脐血库　　CD34细胞　　造血干P祖细胞　　低温保存中国图书资料分类法分类号　　R331.1　　自从1989年第一例患有Fanconi贫血的病人材料与方法[1]采

5、用脐带血移植治愈以及脐带血治疗白血病的方[2]案被确认以来,到目前已经有1000多例脐带血病史调查用于临床。和骨髓及外周血干细胞移植相比,脐带在脐带血收集前,受过培训的脐带血采集员需获血有移植物抗宿主病(GVHD)的病情轻、寻找供体得母亲捐献脐带血的同意书,然后应详细询问孕妇的时间快、传染病污染机会少等多方面的优势,在世界病史、妊娠史、传染病史和遗传病史,检查孕妇在医院许多国家和地区都兴建了大型脐带血库。的各项检验报告,凡孕妇患有与血液有关的各种遗传脐带血库非常适合我国独生子女占优势的国情。病,如地中海贫血、血红蛋白病以及丙

6、型和乙型肝炎、然而,要建成具有cGMP水平,能成功用于临床移植性病、艾滋病等传染病,均应将她们排除在收集脐带的大型脐带血库,应把脐带血造血干细胞的质量控制血对象之外。放在首位,如收集脐带血,控制脐带血的污染,准确地脐带血采集进行组织配型(HLA),有效保存脐带血,为临床提供根据文献报道[3],我们收集脐带血的方法有体高质量的脐带血造血干细胞(活性、细胞数)等重要程序。本文就这一标准,根据我们贮存3000份脐带血　通信作者:周胜利　E2mail:zh2sl2@yahoo.com的经验提出脐带血库的系统操作方法和程序。2000-

7、07-10收稿;2001-01-02接受©1995-2004TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.·154·中国实验血液学杂志JExpHematol2001;9(2)外和宫内采集法,孕妇均足月妊娠、身体健康。体外然后计算出每袋脐带血所含NC总数。活细胞采用采集:200毫升双联的脐带血收集袋(高分子制品),台盼蓝拒染法计数,只对活细胞比率大于95%,以8其内含有28毫升CPDA21抗凝剂。胎盘置于特制及细胞总数大于8×10的脐带血进行保存。的采血车上,按顺序用

8、生理盐水、碘酒、酒精消毒后,组织配型针头刺入脐静脉,血液随着重力流入采血袋中,一般取脐带血1ml用于HLAClassⅠA,B位点血采血量在80-150ml之间。宫内采集:当胎盘还滞清学配型,采用Gentrak或Onelambda血清配型板留在宫内时剪断脐带移走新生儿,消毒脐静脉,采集做血清