酵母菌的培养和形态观察.pdf

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1、山东大学实验报告酵母菌的培养和形态观察胡雪芳201300261033【实验目的】1.了解酵母培养基的特点以及酵母的培养方法。2.学习并掌握酵母制片方法，观察酵母的个体形态及死活细胞区分。3.学习掌握观察酵母的出芽生殖方式。4.学习掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。5.学习和掌握酵母的菌落形态特征。【实验原理】1.酵母菌酵母菌形态：是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。酵母菌繁殖：繁殖方式也比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性生殖

2、是通过质配、核配和减数分裂而产生的子囊孢子。图1.典型酵母（酿酒酵母）生活史山东大学实验报告2.子囊孢子子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。3.美蓝染色本实验通过美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代

3、谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。山东大学实验报告【实验材料】1.菌株表1.菌株。编码菌株拉丁文1普通酿酒酵母SaccharomycescerevisiaeP12安琪酿酒酵母SaccharomycescerevisiaeA13贝酵母Saccharomycesbayanus2.培养基表

4、2.培养基配方编码培养基麦芽汁：150mL琼脂：3g1麦芽汁培养基pH自然（约6.4）灭菌：1.05kg/cm2，20min酵母膏：1%蛋白胨：2%2YEPD培养基葡萄糖：2%pH：6.0灭菌：121℃，15-20min葡萄糖：1.0g酵母浸出物：2.5g乙酸钠：8.2g3麦氏琼脂培养基KCl：1.8g蒸馏水：1000mL琼脂：15-20g灭菌：15磅，15min3.实验试剂表3.实验试剂及其配方。编码试剂配方1生理盐水0.85~0.9%的氯化钠溶液2美蓝染液将0.5%的溶液稀释成0.1%吕氏碱性

5、美蓝染液3水-碘溶液将革兰氏染色中的卢戈氏碘液稀释4倍4芽孢染色液5%孔雀绿、0.5沙黄水溶液、95%乙醇脱色液4.其他普通光学显微镜、吸水纸、载玻片、酒精灯、接种环等。山东大学实验报告【实验步骤】1.麦芽汁培养基的配制（1）取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6-12小时，置15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。（2）将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3-4小时，糖化程度可用碘滴定之。（3）将糖化液用3

6、-4层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。（4）将滤液稀释到5-6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。2.酵母菌的一般培养将酵母菌A和酵母菌B分别利用分区划线方法接种到YEPD培养基起点上，在28-30℃恒温培养箱中，倒置培养1-2天。图2.分区划线法示意图山东大学实验报告3.酵母子囊孢子的诱导产生（1）菌体活化：将菌株分别接种到YEPD平板，28-30℃，倒置培养1-2天。连续

7、传代2-3次，产生健壮和旺盛的活力细胞。（2）饥饿处理：取适量活力酵母菌细胞，用手敲击使之在生理盐水中做成均匀细胞悬液。（3）生孢诱导：取一滴或一接种环菌悬液滴在麦氏琼脂平板上，静置几分钟，使菌液浸入琼脂中，不要旋转或者斡旋平板。25℃，培养7天。4.酵母菌制片与简单染色——美蓝染液水浸片法（1）取干净载玻片，滴加一滴0.1%吕氏美蓝染液于载玻片中央，无菌操作取YEPD平板上38-30℃培养1-2天的培养物适量，涂抹于染液中，做成分散的细胞悬液。（2）用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢

8、将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。（3）将制片放置约3分钟后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。（4）染色30分钟后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。水-碘溶液水浸片步骤与美蓝水浸片制片方法相同。5.酵母子囊孢子染色——孔雀绿染色法（1）取干净载玻片，滴加一滴蒸馏水，无菌操作取第3步诱导后培养物适量，涂抹于水中，做成分散的细胞悬液，涂片干燥和加热固定。山东大学实验报告（2）用5%的孔雀绿染色1-2分钟，然后水洗；（3）用95%的乙醇脱色