快速显色法筛选白蔹醇提物抗菌活性开题报告

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1、开题报告快速显色法筛选白蔹醇提物抗菌活性1选题的背景和意义随着生物材料产业的高速发展，生物材料的相关感染已经成了临床上一个非常棘手的问题。根据统计，在美国仅因导尿管感染而产生的菌尿症患者就占总感染占30%，相关费用每年超过16亿美元。因此，抗菌生物材料的研究已经成为目前研究的重点之一。目前，国内和国际上都规定用菌落计数法作为抗菌定量标准检验方法之一。但菌落计数法操作繁琐，需时长，要求在48h后才能计数总菌落数。而在实际工作中，由于中药资源很庞大，特别是其次生代谢物众多，采用传统的筛选方法从中筛选具有抗菌活性的组分(成分)费时而低

2、效并且消耗很大。因此，急需找到一种快速、简便、准确可靠的检验方法来代替菌落计数法，以适应生产的需要。2相关研究的最新成果及动态美兰还原法与刃天青还原法同是检测微生物的一种快速方法，试验研究中，刃天青还原法的还原时间快于美兰还原法，且颜色变化为不可逆性反应。国外自1929年就将刃天青还原法应用于牛乳的卫生质量检验，国内也有应用。但用刃天青检验白蔹不同极性提取物抗菌的方法，国内外未有报道，因此我们选择此项研究试验，目的是找到一种快速、简便、准确可靠，对生产有指导作用的检测方法。3课题的研究内容及拟采取的研究方法、难点及预期达到的目标

3、3.1课题研究内容通过刃天青做指示剂，用快速显色法探索不同醇提物（本实验采用甲醇、乙醇、正丁醇三种）的抗菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）活性。3.2白蔹抗菌活性的测定材料白蔹金黄色葡萄球菌大肠杆菌主要仪器及试剂粉碎机烘箱40木筛96孔板刃天青乙醇正丁醇甲醇牛肉膏蛋白胨固体培养基TSBYE培养基3.2.1方法样品制备将白蔹干燥至恒重，粉碎后过40目筛，精密称取50.00g置于索氏提取器中，用甲醇、乙醇、正丁醇分别提取至无色，分别用旋转蒸馏回收溶剂，得到甲醇、乙醇和正丁醇的提取物，置于4℃保存备用。抗菌活性检测1.培养基的配制牛肉膏蛋

4、白胨培养基：称取牛肉膏3g蛋白胨10g氯化钠5g琼脂15-20g，按以上配方配制1000mL培养基，调节pH值于7.0-7.2之间，微波加热后，121℃高压灭菌20minTSBYE培养基：胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤（TSB－YE）：胰酪胨蛋白胨（或胰蛋白胨）、植物（大豆）蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、葡萄糖、酵母浸膏、蒸馏水。将各成分加热煮沸溶解冷却后，调整至pH7.3左右，分装于三角瓶中，每瓶225mL，于121度高压灭菌15分钟2.10%细菌隔夜培养液的制备分别将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在相应斜面培养基上37℃活化24h，向试管中

5、加入适量灭过菌的生理盐水（0.9%），振动均匀，得菌悬液。3.以刃天青为指示剂进行快速筛选将每种提取液分别取1μl加样在96孔板中(每个孔中含有100μlTSBYE培养基和10%细菌隔夜培养液)。将96孔板放置在厌氧条件下培养16～18h。在每个孔中加入刃天青指示剂3μl，再放置1～2h以观察指示剂的颜色变化，判断提取物的抑菌活性。4.琼脂法进行验证将初步确定有抗菌活性的提取物以及对照稀释，取稀释后的样品液50μl涂布在琼脂糖血平板上，培养过夜，观察结果。3.2.2结果与分析以刃天青为指示剂进行快速筛选的技术建立该方法以刃天青为

6、指示剂，通过观察孔中的颜色就可以判断该植物提取物是否有抗菌活性。该方法基于以下的原理：活细菌新陈代谢的产生，使刃天青指示剂由蓝色变为粉红色，而死细菌则不能。因此，根据颜色从青蓝-红紫-粉红的变化情况，可以判定孔中的细菌是否被样品抑制，颜色为蓝色就代表这个孔中的提取液中含有抗菌的物质存在，而为红色就说明提取液中没有抗菌的物质存在，可对样品的抑菌性进行初步的判断。每个孔中加入50μl的培养液和8μl的刃天青，通过颜色的不同可以判断孔中细菌的浓度。通过测定OD600可以得到对应结果。3.3流程图菌种菌种活化菌种悬浮液和培养基制备以刃天

7、青为指示剂进行快速筛选琼脂法进行验证结果与分析3.4课题难点及预期目标课题的难点在于抗菌物质的有效提取以及操作过程的注意杂菌的影响。预期目标刃天青呈现蓝色，证明白蔹的醇提物中含有抗菌物质。4论文工作进度和安排2010年11月22日前，选题，明确论文任务；2011年1月10日前，在广泛查阅文献资料的基础上，完成外文翻译、文献综述和开题报告等工作；2011年5月23日前，进行课题的实验、设计、调研及结果的处理与分析等，完成毕业设计说明书或论文写作，进行毕业设计（论文）的修改完善；2011年6月10日前，毕业设计（论文）答辩。5参考文

8、献1周英,钱利安,黄赤夫.一种通过快速显色筛选植物提取物的抗菌活性的方法[J].食品科学,2008,29(5),140-1412郭丽冰,何小群.广东白蔹化学成分的初步研究[J].广东药学,1996,1,20-363俞琦,蔡琨,田维毅.白蔹醇提物免疫活性的初步研究