AKTA使用方法

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1、AKTA使用方法：阴/阳离子交换柱（1）buffer都要进行超声除气10min（母液需要用0.45μm过滤膜过滤）。（2）洗泵。点击Pumps→StartpumpAwash和StartpumpBwash。用QAbuffer冲洗pumpA，用QBbuffer冲洗pumpB。（3）洗系统（管道）。将Conc%B改为100%，点击Startsystemwash。（4）改流速，平衡柱子。将Systemflow的流速改为合适的流速（4mL/min,2mL/min,0.4mL/min），点击Setflowrate。然后选择柱位。用QBbuffer平衡Q柱

2、4-5个柱体积，再用QAbuffer平衡Q柱4-5个柱体积。（5）准备收集盘，设置运行程序。准备烧杯收集outlet。（6）上样，选择Apump上样，当电导上升时waste改为outlet。上样不要进气泡，上样结束后将Apump放入BufferA。电导下降到约1时，outlet改为waste，停止程序。（7）Elution,运行洗脱程序。（设置程序时，一定要勾选usingfractioncollector）（8）及时将outlet取出并保存好。（9）收集收集管，并将buffer放回。Superdex(分子筛、凝胶过滤层析)（1）浓缩。将蛋白样

3、品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。（2）洗泵。用Superdexbuffer冲洗pumpA。（3）用Superdexbuffer冲洗整个系统（整个系统体系6-8mL）两个柱体积（约10mL左右）。（4）平衡。用Superdexbuffer平衡两个柱体积（柱体积23.65mL）。（5）准备收集盘，用Superdexbuffer冲洗Loop环，设置运行程序。（6）上样，运行程序。（设置程序时，一定要勾选usingfractioncollector）（7）根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。（8）根据分子筛图和SDS-PAGE电

4、泳图，选择最终收集的样品。分装到1.5mLEp管中，置于-80℃冰箱保存。