公英青蓝合剂中添加金刚乙胺的测定　超高效液相色谱-串联质谱法（定稿）

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1、ICS11.220B42DB37山东省地方标准DB37/TXXXXX—XXXX公英青蓝合剂中添加金刚乙胺的测定超高效液相色谱-串联质谱法Determinationadditionofrimantadineingongyingqinglanmixture—UPLC-MS/MSXXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施山东省市场监督管理局发布DB37/XXXXX—XXXX目次前言II1范围12规范性引用文件13原理14试剂或材料15仪器设备16试验步骤26.1样品溶液的制备26.2基质匹配对照溶液的制备26.3仪器参考条件26.4测定37试验数据处理38精密度3附　录　A（

2、资料性附录）金刚乙胺特征离子质量色谱图44DB37/XXXXX—XXXX前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省市场监督管理局提出并监督实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。本标准主要起草人：张传津、魏秀丽、李有志、陈玲、张志民、赵有轩、张呈军、章安源、尹伶灵。4DB37/XXXXX—XXXX公英青蓝合剂中添加金刚乙胺的测定　超高效液相色谱-串联质谱法1　范围本标准规定了公英青蓝合剂中金刚乙胺的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于公英青蓝合剂中金刚乙胺的测定。本方法检测限为2μg/mL，定量限为5

3、μg/mL。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3　原理公英青蓝合剂中的金刚乙胺经稀释后，超高效液相色谱串联质谱测定，依据保留时间和离子丰度比定性，外标法定量。4　试剂或材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯；水符合GB/T6682一级水的规定。4.1　甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.2　甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.3　流动相：a)流动相A甲醇(含0.1%甲酸)：吸取甲酸（4.2）1.0mL

4、，加甲醇（4.1）稀释至1000mL，过0.22μm微孔滤膜备用；b)流动相B水溶液（含0.1%甲酸）：吸取甲酸（4.2）1.0mL，加水稀释至1000mL，过0.22μm微孔滤膜备用；c)初始比例流动相：量取甲醇（含0.1%甲酸）（4.3.1）100mL与水溶液（含0.1%甲酸）（4.3.2）400mL，混匀，备用。4.4　金刚乙胺对照品，纯度不得小于99.9%。4.5　金刚乙胺对照储备液：称取金刚乙胺对照品（4.4）10mg（准确至0.01mg），置100mL容量瓶中，加甲醇（4.1）溶解并稀释至刻度，摇匀。4℃冰箱保存，有效期3个月。4.6　有机微孔滤膜：0.22μm。

5、5　仪器设备4DB37/XXXXX—XXXX1.1　高效液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。1.2　分析天平：感量0.00001g。1.3　离心机（5000r/min）。2　试验步骤2.1　样品溶液的制备公英青蓝合剂摇匀，精密吸取空白公英青蓝合剂0.2mL，置50mL离心管中，加19.8mL甲醇（4.1），超声处理10min，5000r/min离心5min，有机微孔滤膜过滤，精密量取滤液1mL，置50mL容量瓶中加初始流动相（4.3.3）稀释至刻度，摇匀，有机微孔滤膜滤过，即得空白基质溶质。待测样品以上法处理，得供试样品溶液。2.2　基质匹配对照溶液的制备精密吸取金

6、刚乙胺对照储备液（4.5）0.2mL，置20mL容量瓶中，加空白基质溶液（6.1）稀释至刻度，摇匀，从中精密量取1mL置50mL容量瓶中，加空白基质溶液（6.1）稀释至刻度，摇匀，滤过，即得20ng/ml的对照溶液。2.3　仪器参考条件2.3.1　高效液相色谱参考条件色谱柱：C18色谱柱，50mm×2.1mm×1.7μm，或性能相当者。流动相A：甲醇（含0.1%甲酸）。流动相B：水溶液（含0.1%甲酸）。流速：0.3mL/min。进样量：10μL。柱温：35℃。液相色谱梯度洗脱条件见表1。表1　液相色谱梯度洗脱条件时间/min流速/(mL·min-1)流动相A/%流动相B/%

7、曲线00.320800.50.3208062.00.3802063.00.38020640.32080150.320802.3.2　质谱参考条件电离模式：电喷雾正离子（ESI+）。毛细管电压：3kv。离子源温度：110℃。脱溶剂温度：320℃。4DB37/XXXXX—XXXX脱溶剂氮气流速：550L/h。检测方式：多反应监测（MRM）。金刚乙胺的定性、定量离子对和碰撞能量见表2。表1　定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量品名定量离子对定性离子对锥孔电压/V碰撞能量/eV金刚乙胺180.6＞163.