发酵综合实验 实验报告

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1、目录摘要21引言42材料与方法53结果与讨论104总结155心得体会15参考文献1517蛋白酶的发酵工艺研究摘要中性蛋白酶是最早被发现并广泛应用于工业化生产的蛋白酶制剂，可用于皮革脱毛、软化、畜禽血液蛋白质水解、果酒、啤酒和饮料的澄清以及医学治疗等应用领域中。本文对一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌（AS1.398）的发酵条件进行了研究，考察不同因素条件下对产酶的影响。通过摇瓶培养研究碳源浓度，不同接种量对蛋白酶产量的影响。利用酪蛋白培养基的平板实验观察蛋白酶的性质。利用发酵罐培养观察时间对产酶的影响.结果表明:豆饼粉3.0g/100ml，玉米粉4.0g/100ml，

2、麸皮粉2.5g/100ml，磷酸氢二钠0.4g/100ml，磷酸二氢钾0.03g/100ml，pH7.2-7.4为最适宜培养基组分。并且发酵罐培养的产酶活性高于摇瓶培养。关键词：中性蛋白酶；枯草芽孢杆菌；摇瓶培养；发酵罐17TheFermentationProcessResearchofProteaseAbstractNeutralproteaseisthefirsttobediscoveredandwidelyusedinindustrialproductionoftheproteasepreparation,whichcanbeusedforleatherh

3、airremoval,softening,animalbloodproteinhydrolysis,wine,beerandbeverageclarification,andinapplicationssuchasmedicaltreatment.ThefermentationconditionsofaBacillusSubtilis（AS1.398）whichcanproduceneutralproteasewerestudiedinthispaper.Undertheconditionofdifferentfactorstoexaminetheinfluen

4、ceofenzymeproduction.Thisstudydiscussedconcentrationofcarbonsource,differentinoculumonproteaseyieldbyshakeflask.Caseinpetridisheshasbeenusedintheobservationofthenatureoftheprotease.Fermentationtanksculturewasusedforobservingtime'seffectionontheproductionofenzymes.theresultsshowedthat

5、soybeanmeal3.0g/100ml,cornflour4.0g/100ml,wheatbranpowder2.5g/100ml,disodiumhydrogenphosphate0.4g/100ml,potassiumdihydrogenphosphate0.03g/100ml,pH7.2-7.4wasthemostappropriatemediumcomposition.EnzymeproductionactivityofFermentationtanksculturewashigherthanshakingculture.Keywords:Neutr

6、alprotease；Bacillussubtilis；Shaking17culture；Fermentation171引言1.1自然界中有大量产泌外蛋白酶微生物，其中以微生物的产酶活性最优。微生物来源蛋白酶一般按蛋白酶的最适pH值分为酸性、中性、碱性蛋白酶三类。中性蛋白酶最早被发现并广泛应用于工业化生产中。本实验采用枯草芽孢杆菌AS1.398做为研究菌株，其产酶量大，酶的耐热性好，因而被广泛应用于工业化生产中。此菌株在C/N为1:4左右时的产蛋白酶活性最高，并且有机N源优于无机N源，因而其发酵成本较高。探索新的发酵途径，寻找更加经济的组合方式显出了重大的意义。

7、1.2此次实验主要做蛋白酶摇瓶发酵工艺的优化，改变发酵的C源浓度和接种量，测定蛋白酶酶活，以确定最优的发酵工艺条件。提取发酵液中的蛋白酶，测定酶活算出前后总活力，计算得率。并且进行发酵罐培养实验，比较发酵罐培养与摇瓶培养的产酶活性差异。通过此次实验学习蛋白酶的测定方法和发酵液酶蛋白的初步提取方法，考察不同发酵条件对微生物产酶的影响，以及熟悉小型发酵罐的使用方法，包括灭菌，清洗，加料，接种，取样等环节。172材料与方法2.1菌种枯草芽孢杆菌（B.subtilis）AS1.3982.2试剂（1）生理盐水：称取0.85gNaCl,用蒸馏水定容至100ml,即为0.85

8、%生理盐水，121℃灭菌