一株海水光合细菌的分离鉴定及在轮虫增养殖的应用【开题报告】

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1、毕业论文开题报告海洋生物资源与环境一株海水光合细菌的分离鉴定及在轮虫增养殖的应用一、选题的背景与意义光合细菌(PhotosyntheticBacteria)简称PSB，是地球上最早出现的具有原始光能合成体系的原核生物。光合细菌属于水圈微生物的一种，光合细菌广泛分布于地球生物圈的各处，无论是海洋、湖泊、江河，还是水田、池塘、沼泽、污泥、氧化池、硫磺泉、土壤、极地，甚至在90℃的温泉中、在300℃的盐湖里、在深达2000m的深海、在南极冰封的海岸上，都能找到其踪迹。光合细菌具有多种生理功能，代谢类型极为多样，有光能自养、异养和混养多种

2、营养生长方式，具有光合、固碳、降解大分子有机物、固氮、脱氮、硝化、反硝化、硫化物氧化等代谢方式，光合细菌进行光合作用一般是在厌氧光照条件下，以简单的有机物为供氢体，固定CO2进行光合磷酸化和光氧化还原反应。而在好氧黑暗条件下，光合色素的合成受到抑制，胞内缺少内质膜系统，则和好氧型微生物一样，通过氧化磷酸化获取能量，另外还可通过脱氮或发酵获得能量，光合细菌对简单碳化物代谢具有很大的多样性，它也许是自然界发现的营养代谢类型最丰富的微生物之一。因固氮酶的存在而具有固氮能力，光合细菌对氮源的利用较广，一般均可利用铵盐、氨基氮，少数种类还能

3、利用硝酸盐和尿素。这种随着生长条件的变化而灵活地改变代谢类型的特性使光合细菌与其他光合生物一起构成了自然界生态系统的原始生产者，在自然界物质转化和能量循环中起着重要的作用。在鱼类、甲壳类的人工育苗生产中,需供给动物性活饵料。我国自20世纪50年代后期开始，先后开展了轮虫、卤虫、双壳类的卵和幼体、糠虾等动物性饵料的培养和生产。其中轮虫作为鱼、虾、蟹等幼体的开口饵料，其适口性、可得性、营养价值及饲养效果均优于其他饵料，而且轮虫适应性强、生长快、繁殖迅速、培养成本低，极易在生产实践中推广应用。尽管人工微粒饵料的使用越来越多，但作为生物饵

4、料，轮虫在控制水质、提高幼体成活率等方面具有明显的优势。影响轮虫高密度增殖的主要因素为饵料、氧、氨氮的积累和残饵、粪便等代谢产物。在轮虫培养中，随着种群密度的增大，轮虫分泌和水中有机质分解产生的氨将积累到相当浓度，并产生明显的毒性，这些悬浮物有机质还会堵塞回收轮虫用的浮游生物网，不仅阻碍轮虫的回收和清洗，而且伴随着这些轮虫的投喂，还成为了仔、稚鱼疾病的病因。这些有机质更成为细菌的营养源而繁殖出大量的以弧菌、不动杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、霍乱菌、巴氏杆菌、水中产气单胞菌等为优势菌的菌群，严重影响了轮虫的培养，更使轮虫的品质下降。鉴于光

5、合细菌的这些特性以及轮虫增养殖中存在的问题，通过选择合适的光合细菌和确定合适的菌液添加剂量，形成优势菌群，以消耗残饵、粪便等代谢产物，减少氨氮的产生并消耗产生的氨氮。并且在消耗这些阻碍轮虫培养的物质的同时，产生的菌体可以作为轮虫的优质饵料，以使轮虫培养过程中密度、生产力和生产效率都有明显的提高。这一研究结合了当前水产养殖育苗业的发展现状，有助于解决一些实际问题，产生巨大的经济效益，对水产养殖业的发展有积极影响。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：基本内容：1.光合细菌的分离纯化；2.光合细菌基本特性研究；3.光合细菌生理特性的研

6、究；4.光合细菌16SrDNA测序及其系统发育分析；5.褶皱臂尾轮虫的实验室训化；6.光合细菌对轮虫增养殖的影响研究；7.光合细菌应用于轮虫培养的最佳配比探索；8.光合细菌应用于轮虫增养殖的前景探讨。拟解决的主要问题：通过本课题完成海水光合细菌的分离鉴定，得到其应用于轮虫增养殖的实际数据，为其在水产养殖育苗方面的应用理论依据。三、研究的方法与技术路线：(一)研究方法：1.光合细菌的富集样品的采集按照《海洋调查规范》(国家海洋局,1975)的要求进行。应用深水采样器采集养殖池海水。应用采泥器采集表层泥样，分别取水样1mL、泥样1g于

7、螺口厌氧管中，加灭过菌的液体培养基至满，拧上螺口帽，混匀。带回实验室，放入32℃光照强度为3000-5000lux的培养箱培养。光下培养约5-15天，待有红色、粉色、黄色或褐色生长物明显生长后，再连续转接多次以求培养液中光合细菌占优势，待进一步分离。泥样取自浙江宁波的象山、北仑、宁海等地的海水养殖塘，培养基为AT基础培养基。2.光合细菌的纯化和鉴定2.1光合细菌纯化本次实验采用多种方法纯化菌种至DGGE检验出现单一稳定的条带，挑取单菌落接种到扩繁培养基中扩大培养，视纯化效果多次分离纯化3代或更多代，镜检无异常方初步认为纯种。2.2

8、DNA模板的制备传统法提DNA（LiLetal.,1999）或者用基因组DNA快速提取法：将收集的菌体细胞用无菌PCR用水悬浮，在沸水浴中煮10-15min，随后离心，取上清液直接作为PCR扩增的DNA模板。2.3细菌16SrRNA基因V3区的PC