胚胎实验室操作手册

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1、附件6-01胚胎实验室操作手册第一节胚胎实验室每日工作流程第一节胚胎实验室安全与质量控制一、实验室安全与感染控制实验室必须有完善的安全制度和防患措施，必须有关于火、电意外引起紧急情况时的应急方案，实验室人员必须了解灾情中的救援措施。为避免停电影响设备正常运转，应备有双重供电系统，或不间断电源（UPS），以确保二氧化碳培养箱和显微镜等关键设备在意外停电时满足正常工作。1.所有体液样本（精液、血液、卵泡液等）必须视同潜在污染源，所有的供体组织和体液应有适当的传染病监测。2.实验室工作人员应清楚乙肝疫苗的必要性并接受乙肝疫苗接种。3.特别小心不要被那些受体液污染的仪器或设备意外损伤。4.避免将体液溅

2、到眼中。5.当接触体液或盛放体液的容器时，应带一次性无粉橡胶或塑料手套。离开实验室时，将手套脱下丢掉，决不可重复使用。6.离开实验室时，脱掉实验室衣服，不能穿着出入公开场所或餐厅。7.被体液沾染时，必须马上用消毒液或肥皂清洗。8.接触配子和胚胎的耗材必须使用一次性用品。9.因体液溢出污染实验室设备时，应在操作完成后用75%酒精消毒。10.在实验室体液操作中必须使用机械抽吸装置，禁止用口吸。11.所有操作步骤和体液处理应小心，尽量减少浮滴和烟雾生成。例如离心时必须用带盖的试管。1.实验室中严禁吃东西、吸烟等。2.所有丢弃的体液和用后的一次性物品必须按污染物品处理。一、实验室质量控制(一)培养箱的

3、质量控制专人管理，每日确认以下各项内容并予以记录：1.CO2的控制：6%±0.2%；2.温度的控制：37℃±0.2℃；3.湿度：大于80%RH，水盘内水的深度始终保持在大约1cm以上。培养箱内的水盘使用超纯水，根据不同培养箱要求定期更换，换水当天培养箱不放卵子或胚胎；4.培养箱显示器温度与培养箱内温度计的温度应一致。不一致时应及时调整校正。5.消毒清洁：每隔3个月消毒培养箱。消毒时拆卸培养箱内所有钢架，以75%酒精和超纯水分别擦拭消毒，再送高压消毒。培养箱内壁以75%酒精和超纯水分别擦拭。消毒清洁完成后，需开机运行稳定后方可使用。(二)培养用气体的质量控制1.使用有合法资格的气体供应厂家，气瓶

4、使用前需检查是否有合格证标签。2.使用医用高纯度CO2（99.995%以上）培养胚胎。每天记录气瓶的压力，定期检查气瓶有无漏气并更换培养箱外气体过滤器。1.CO2进入培养箱之前，必须经过CODA过滤器对CO2进行过滤。CODA过滤器应定期更换，根据供气量，每3-6个月更换一次。2.CO2分压应与培养箱要求的压力相符，当气瓶CO2气体接近用完时，应及时更换新的气瓶，记录更换气瓶时间。(一)UPS的质量控制重要仪器如培养箱、显微镜、冰箱等必须连接到UPS上，每日观察UPS工作状态，如有异常及时找工程师维修。(二)液氮罐的质量控制1.胚胎冷冻液氮罐需每天查看外观，每周至少两次检测剩余量，按时添加液氮

5、，使液氮深度保持在25cm以上。2.液氮运输罐需专人更换。3.液氮罐应存放于固定位置。4.液氮罐应每3年进行一次校验。(三)超净工作台的质量控制1.超净工作台层流系统提供洁净环境，用于胚胎培养的准备工作，如培养液配制、培养皿准备、胚胎操作等，不能进行其它存有污染性的操作。2.超净工作台应于每天工作前提前30分钟开启，台面温度应稳定于设定的温度。3.超净台每年应至少检测一次洁净度。(四)实验室层流系统的质量控制1.体外受精实验室温度维持在24±2℃之间，湿度在40%以上，每日观察并记录温度和湿度，如果波动过大及时进行调整，若有异常，尽快维护和处理。2.在有胚胎的情况下不能关闭实验室净化空调系统。

6、3.实验室净化空调系统由专业人士检测维护，新风口滤网每2-4周更换一次，回风口滤网每月更换一次，初效过滤器每1-3个月更换一次，中效过滤器每3-6个月更换一次，高效过滤器每1-2年更换一次，并做好维护检测记录。如遇特殊情况，及时更换。4.每日观察并记录胚胎实验室与冷冻间、缓冲间、移植手术室及取卵手术室之间的压差。如果压差＜5Pa，应查找原因，及时检修和维护。5.每月进行实验室空气细菌培养。(一)冰箱的质量控制专人管理，每天检测并予以记录。1.冷藏层：2~8℃；2.冷冻层：-15~-20℃。(二)热台的质量控制专人管理，每天操作前检测并予以记录。要求：38℃±0.5℃。(三)实验室仪器设备的使用

7、和维护1.建立设备常规操作程序，并严格按照操作程序执行。2.保存各种设备的使用说明文件。1.仪器设备的维修保养应严格按照规定的程序进行，有关人员在进行保养、调校和维修工作以前，应首先熟悉仪器的性能、结构、使用方法和保养、调校方法，以及维修程序。2.仪器设备一旦出现异常或发生故障，使用人员应立即关机观察，防止事故扩大，及时向实验室负责人或中心负责人汇报，然后通知修理人员组织维修。3.定期由专业技术人