聚磷菌的培养

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1、聚磷菌的培养背景：污水中的磷和氮含量过高是造成水体富营养化的主要因素。而其中的磷不像氮那样可以结合氧转化为气体，含磷的气态物质（PH3）又不易转化，所以污水除磷一直都用生物除磷法。即用细菌等微生物来摄取水中的磷，达到除磷的效果。而为了提高微生物除磷的效率、便于和其他材料协同使用，筛选、培养除磷细菌也是必不可少的工作。培养菌种菌落：聚磷菌（PAOs）菌落来源：废水除磷工艺中的活性污泥菌落组成：主要由β—2亚群紫色细菌、不动杆菌、红环菌属和绿单胞菌属组成；其中不动杆菌为主导细菌，除磷作用突出聚磷菌除磷机理：①好氧条件下，聚磷菌不断摄取并氧化分解有机物，产生的能量

2、一部分用于磷的吸收和聚磷的合成，一部分则使ADP与H3PO4结合，转化为ATP而储存起来。细菌以聚磷的形式在细胞中储存磷，其量可以超过生长所需，这一过程称为聚磷菌磷的摄取。处理过程中，通过从系统中排除高磷污泥以达到除磷的目的。②在厌氧条件下，聚磷菌体内的ATP进行水解，放出H3PO4和能量，形成ADP。这一过程称为聚磷菌磷的释放。聚磷菌除磷则就是通过以上两种过程完成的。培养过程：1、材料准备1.1取样：从实验室运行稳定的厌氧缺氧SBR反应器中，取富含反硝化聚磷菌的活性污泥做为实验样品。1.2培养基配方：(1)牛肉膏蛋白胨培养基（L）：蛋白胨10g；牛肉膏3g

3、；NaCl5g；琼脂20g；pH7.2，用于反硝化聚磷菌的分离、纯化(2)缺磷培养基（L）：CH3COONa2g；Na2HPO4·2H2O23mg；CaCL2·2H2O11mg；NH4C1152.8mg；MgSO4·7H2O81.12mg；K2SO417.83mg；HEPES缓冲液7g；微量元素2mL；pH7.2(3)富磷培养基（L）：CH3COONa2g；K2PO425mg；NH4C1305.52mg；MgSO4·7H2O91.26mg；CaC12·2H2O25.68mg；PIPES缓冲液8.5g；2mL微量元素；pH7.2(4)硝酸盐还原产气试验培养基（L

4、）：牛肉膏3g；蛋白胨5g；KNO31g；pH7.4。2~4类培养基用于反硝化聚磷菌的筛选。2、培养基制作2.1牛肉膏蛋白胨培养基A根据需要计算每个培养基所需要的药品质量B按培养基配方、具体计算量和比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。(牛肉膏可用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯)C先在上述烧杯中加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，再将称好的琼脂放入已溶化的药品中，然后在石棉网上加热使其溶解、溶化。（在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂）最后补足所失的水分到所需的总体积。D用精密pH试纸测量培养基的原始p

5、H值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，直至pH达7．2。反之，则用1mol/LHCl进行调节。（注意pH值不要调过头，以避免回调）E将或加热融化后的培养基冷至50℃左右，以无菌手续倾人灭菌平皿内，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，再次高压灭菌，之后待其凝固即可。（灭菌后的培养基要放入37℃养箱中培养24小时，以检验灭菌的效果）F检验合格的培养基编号待用。可放在4℃冰箱内保存，但是不宜存放时间过久2.2缺磷培养基A根据需要计算每个培养基所需要的药品质量B按培养基配方、具体计算量和比例依次准确地称取各类药品。先在三角烧瓶中

6、加入少量蒸馏水，再加入各种称量好的药品C搅拌、适当加热使药品溶解，并加蒸馏水至所需体积D用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，直至pH达7．2。反之，则用1mol/LHCl进行调节。（注意pH值不要调过头，以避免回调）E用滤纸过滤，直至液体培养基清晰便于观察即可F根据需要将培养基分装于各个三角烧瓶中，高压灭菌。（灭菌后的培养基要放入37℃养箱中培养24小时，以检验灭菌的效果）G检验合格的培养基编号待用。可放在4℃冰箱内保存，但是不宜存放时间过久2.3富磷培养基同“缺磷培养基”2.4硝酸盐还

7、原产气试验培养基A根据需要计算每个培养基所需要的药品质量B按培养基配方、具体计算量和比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、KNO3放入烧杯中。(牛肉膏可用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯)C搅拌、适当加热使药品溶解，并加蒸馏水至所需体积D用滤纸过滤E根据需要将培养基分装于各个三角烧瓶中，高压灭菌。（灭菌后的培养基要放入37℃养箱中培养24小时，以检验灭菌的效果）F检验合格的培养基编号待用。可放在4℃冰箱内保存，但是不宜存放时间过久2、菌株的分离、纯化、筛选2.1菌株的分离、纯化：A）取10mL污泥至装有90mL无菌水三角瓶中，加入玻璃珠，将

8、三角瓶放入空气振荡器中，把污泥充分摇匀