微生物菌种保藏方法76891

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1、微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下,只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基木的微生物保存法，例如酸奶等常用牛产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适牛长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基屮添加少最碳酸钙。一般地，大多数菌种的保藏温度以5£为好，像厌氧菌、崔乱弧菌及部分病原真菌等微纶物菌种则可以使用37°C进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温总接保存。传代培养保存法

2、虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成砲了的能力等均冇降低；④需要定期转种，工作虽大；⑤杂菌的污染机会较多。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止T•燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微住物（如产他能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉

3、等不宜采用此法进行保存。3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种,如①土壤保存法：主婆用于能形成抱子或他囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤屮加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。使微牛物在土壤屮繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）宜于塞有棉塞的试管屮，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最人持水量的60%为宜），然后高压灭菌。再将需保存的微生物进行大量接种，培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止，移入T燥器屮

4、经短时间干燥或风干示密封，冷藏或室温保存。①砂土保存法：取清洁的砂，过60目筛去掉人砂粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持2〜3cm深，再经干热灭菌后，加入lnil菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂（经HC1预处理）和一份贫瘠、过筛的黄十•搀和后灭菌，再进行菌种保藏。②硅胶保存法：以6〜16目的无色硅胶代替砂了，干热灭菌示，加入菌液。加菌液时,由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而碍设法加以冷却。③磁珠保存法：将菌液浸入素烧磁珠（或多孔玻璃珠）后再进行干燥保存的一种

5、方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶（或无水CaSOd）,上铺玻璃棉，再放上10〜20粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。④秋皮保存法：在荻皮内加入60%的水，经灭菌后接种培养，最后十燥保藏。⑤纸片（滤纸）保存法：将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥示，置于装有干燥剂的容器内进行保存。4、悬液保存法：即使微牛物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有，①蒸镭水保存法：适用于得菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸懈水中即可在室温下保存数年。木法应注意避免水分的蒸发

6、。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的廉糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。5、奇主保存法：即令微牛物侵入其奇主后加以保存的方法。6、冷冻保存法：适用于抗冻力强的微生物。这些微生物对在其菌体细胞外遭受冻结的情况卜-而不受损伤，而对其它大多数微生物而言，无论在细胞外冻结述是在细胞内冻结，都会对菌体造成损伤，因此当采用这种保藏方法时，应注意以下几点，①要选择适丁-冷冻「燥的菌龄细胞;②要选择适宜的培养基，因为某些微牛物对冷冻的抵抗力，常随培养基成分的变化而显示出巨大差界；①要选择合适的菌液浓度，通常菌液浓度越高，牛存率

7、越高，保存期也越长；②最好在菌液内不添加电解质（如食盐等）；③可在菌液内添加甘汕等保护剂，以防止在冷冻过程屮岀现菌体人量死亡的现象。同样,也可添加各种糖类、去纤维血液和脱脂牛乳等具有良好保护效果的溶剂，但对有些微生物而言，不加保护剂时更冇效。④原则上应尽快进行冷冻处理，但当加入保护剂时，可静迸一段时间后再进行处理。⑤就动物细胞而言，应在一20°C范围内以l°C/niin左右的速度缓慢降温，此后必须尽快降到贮藏温度;而对绝大多数微生物而言，则不必如此，如结构鮫为复杂的原虫则可在一3