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1、冰石愈伤软膏无菌检查方法验证药物鉴定冰石愈伤软膏无菌检查方法验证2011年第20卷第8期李秋菲-,刘瑜,施瑞洁(1.陕西省食品药品检验所,陕西西安710061;2.西安日化医院,陕西西安710050;3.陕西省人民医院,陕西西安710060)摘要:目的建立冰石愈伤软膏的无菌检查方法并对方法进行验证.方法按2005年版《中国药典(一部)》软膏剂项下要求进行试验,采用薄膜过滤法,冲洗量为300mL.结果样品管无菌生长,6株阳性对照菌生长良好.结论采用薄膜过滤法验证试验进行冰石愈伤软膏的无菌检查,方法有效,可行
2、.关键词:冰石愈伤软膏;无菌检查方法;薄膜过滤法;方法验证中图分类号:R286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2011)08—0040—02冰石愈伤软膏为外用制剂方中含大黄,人工牛黄,人工麝香等,对金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌,白色念珠菌有抑制作用,且本身又含有基质,必须以适当方法对供试品进行前处理,消除其抑菌作用,才能进行无菌检查.2005年版《中国药典(一部)》规定,用于烧伤或严重创伤的软膏剂按无菌检查法检查…,不得有菌生长.通过研究,笔者采用薄膜过滤法用4株细菌,2株真菌进行了无菌检查
3、方法验证试验,以确认该法是否适用于冰石愈伤软膏的无菌检查,现报道如下.1仪器,试药与菌种HTY一2000型智能集菌仪;KSF一次性全封闭集菌器(杭州泰林生物技术设备有限公司).冰石愈伤软膏(西安强生药业有限公司,规格为18g/支,批号为20090105).金黄色葡萄球菌fCMCC(B)26003】,铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104】,枯草芽孢杆菌[CMCC(B163501】,生孢梭菌【CMCC(B)64941】,白色念珠菌[CMCC(F)98001】,黑曲霉【CMCC(F)98003】均来自于中国药
4、品生物制品检验所,前5株菌传代数为第3代,黑曲霉为第2代.硫乙醇酸盐培养基(批号为070321),改良马丁培养基(批号为0810203),营养琼脂培养基(批号为080922J,玫瑰红钠琼脂培养基(批号为0810233),营养肉汤培养基(批号为07105l8),改良马丁琼脂培养基(批号为080621),pH=7.0的氯化钠一蛋白胨培养基(冲洗剂,批号为071026)均为北京三药科技开发公司产品,配制方法均按瓶签说明配制.0.9%灭菌氯化钠溶液(NS,沈阳化学试剂厂生产,试验室配制).2方法与结果21菌液制备
5、”取枯草芽孢杆菌,铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌的新鲜培养物,分别接种至营养肉汤培养基l0mL中,置30～35℃培养24h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10～～l0,使菌落数为5O～100CFU/mL.接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,于3O～35℃培养16～18h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至50～100CFU/mL,在硫乙醇酸盐培养基中计数;取白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中,于20～25cC培养24h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至50～100CFU/mL;取黑曲霉的新鲜培
6、养物,接种至改良马丁琼脂斜面培养基上,于25℃培养7d,加0.9%无菌氯化钠溶液3mL洗脱孢子,用0.9%无菌氯化钠溶液制成含孢子数50～1O0CFU/mL的混悬液备用.详见表1.22培养基灵敏度和无菌生检查取每管装量为12mL的硫乙醇酸盐流体培养基9支,分别接种小于1O0CFU的金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,枯草芽孢杆?40?表l验证用菌液的稀释度及接种量菌,生孢梭菌各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3d;取每管装量为9mL的改良马丁培养基5支,分别接种小于100CFU的白色念珠菌,黑曲霉各2支,另
7、1支不接种作为空白对照,培养5d.另随机各取5支培养基,培养14d,逐日观察结果.以加菌的培养基管均生长良好,空白对照管无菌生长作为标准,判断该培养基的灵敏度检查符合要求.以培养14d后均无菌生长作为标准,判断该培养基无菌性检查符合要求.23供试液制备取规定量供试品5g,加至含20mL无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的容器中,置45.C水浴中约5min,充分振摇,使其溶解.然后加人预热至45℃的pH=7.0的氯化钠一蛋白胨缓冲液200mL,振摇8min萃取,静置,取其下层水相作为供试液.24薄膜过滤法方法验
8、证取KSF一次性全封闭集菌器(两联)1套,在一管中先泵人培养基并夹紧管口,取其下层水相供试液,置pH=7.0的氯化钠一蛋白胨溶液100mL中,按薄膜过滤法滤至另一管,经冲洗(300mL/膜)并泵入相同培养基,于两管中分别接种人小于1O0CFU的试验菌,前者作为阳性对照管,后者作为试验管.再取硫乙醇酸盐培养基及改良马丁液体培养基,分别泵入另两管集菌器中,作为阴性对照管.各试验菌同法操作,培养3～5d.结果见表2,检品对照和阴性对
