生物化学实验指导：酮体的生成和利用

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1、实验十一酮体的生成和利用【实验目的】了解酮体的生成部位及掌握测定酮体生成少利用的方法。【实验原理】在肝脏线粒休屮，脂肪酸经卩-氧化牛成的过量乙酰辅酶A缩合成酮体。酮体包括乙酰乙酸、卩-疑丁酸和丙酮三种化合物。肝脏不能利用酮体，只有在肝外组织，尤其是心脏和骨骼肌中，酮体可以转变为乙酰辅酶A而被氧化利用。木实验以丁酸为基质，与肝匀浆一起保温，然后测定肝匀浆液屮酗体的生成量。另外,在肝脏和肌肉组织共存的情况下，再测定酮体的牛•成量。在这两种不同条件下，山酮体含量的差别我们可以理解以上的理论。本实验主耍测定的是丙啊的含量。酮体测定的原理:在碱性溶液屮碘可将丙酗氧化成为碘仿。以硫代硫酸钠滴定剩余的碘,可

2、以计算所消耗的碘，由此也就可以计算出酮体(以内酮为代表)的含虽。反应式如下：CH3COCH3十312十4NaOH——►CHI3十CH3COONa十3NaI十3H2O12+2Na2S2O3——►Na2S4O6+2NaI【实验材料】1.实验器材试管；移液管；锥形瓶；滴定管及架。2.实验试剂(1)0.1%淀粉液。(2)0.9%NaCl溶液。(3)15%三氯乙酸。(4)10%NaOH溶液。(5)10%HC1溶液。(6)0.5mol/L丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml0.5mol/LNaOH屮。(7)ol/L碘液：bl2.5g和KI25g力［1水溶解，稀释至刻度1L,用0.1moI/LNa2S2O3

3、标定。(8)0.02mol/LNa2S2O3:24.82gNa2S2O3-5H2O和400mg无水Na£O3溶于IL刚煮沸的水中，配成0.1mol/L溶液,用0.1mol/LKIO3标定。临用时将标定溶液稀释成0.02mol/Le【实验操作】1.标本的制备：将兔致死，取出肝脏，用0.9%NaCl洗去污血，放滤纸上，吸去表面的水分，称取肝组织5g置研钵屮，加少许0.9%NaCl至总体积为10ml,制成川:组织匀浆。另外再取后腿肌肉5g,按上述方法和比例，制成肌组织匀浆。2.保温和沉淀蛋白质：取试管3只，编号，按下表操作：号试剂ABC肝组织匀浆—2.0ml2.0ml预先煮沸的肝组织匀浆2.0ml—

4、—pH7.6的磷酸盐缓冲液4.0ml4.0ml4.0ml正丁酸2.0ml2.0ml2.0ml43°C水浴保温60分钟肌组织匀浆—4.0ml—预先总沸的肌组织匀浆4.0ml—4.0ml43°C水浴保温60分钟15%三氯醋酸3.0ml3.0ml3.0ml摇匀后，用滤纸过滤，将滤液分别收集在3支试管中，为无蛋白滤液。3.酮体的测定取锥形瓶3只，按卜•述编号顺序操作：试剂编号123无蛋白滤液5.0ml5.0ml5.0ml0」mol/LL-KI3.0ml3.0ml3.0ml10%NaOH3.0ml3.0ml3.0ml摇匀，静置10分钟，向各管中加入10%HC13ml,加1%淀粉液1滴呈兰色，分別用0.0

5、2mol/LNa2S2O3滴定至溶液呈亮绿色为止。【实验结果与计算】肝脏生成的酮体量(mmol/g)=(C—A)xNa2S2O3的摩尔数xl/6肌肉利用的酮体量(mmol/g)=(C-B)xNa2S2O3的摩尔数xl/6A:滴定样品1消耗的Na2S2O3ml数。B:滴定样品2消耗的Na2S2O3ml数。C:滴定样品3消耗的Na2S2O3ml数。【思考题】为什么只有在肝外组织，酮体才可以被氧化利用？Experiment11ProductionandDegradationofKetoneBodies[Purpose]Understandtheproductionorgansandmasterthe

6、methodusedforproductionanddegradationofketonebodiesmeasurement.[Principle]Withinthemitochondriaofliver,theexcessacetyl-CoAproducedduringfattyacidp-oxidationisconvertedtoacetoacetate,p-hydroxybutyrate,andacetone,thisgroupofmoleculesiscalledtheketonebodies.Livercannotuseketonebodiesasanenergysource・On

7、lyinseveraltissuesoutofliver,mostnotablycardiacandskeletalmuscle,ketonebodiesarcconvertedtoacetyl-CoA,theacetyl-CoAisthenoxidatedtogenerateenergy・Weusebutyricacidasinitialstuffinthisexperiment,thebuty