资源描述：
《生物化学实验指导：酶的性质》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验四酶的性质【实验目的】1.加深对酶的性质的认识。2.掌握影响酶活力的各种因素及其原理。一、酶的特异性【实验原理】彌的特界性是指陆对•它所催化的反应以及底物结构有严格选择性，-•种酶只对一种物质或一类结构相似的物质起作用。酚比一般催化剂特界性强，因酶是一种蛋白质，结构复朵,在其精细的空间构象屮，存在一个特殊部分“活性部位”，能专一地与对应的底物结合，体现酶的特异性。本实验以蛋白酶和淀粉酶对相应底物蛋白质及淀粉的作用为例。来观察酶的特界性，实验结果的检查根据酪蛋白水解生成酪氨酸，酪氨酸与福林试剂呈蓝色反应，淀粉
2、能与碘起蓝色或兰紫色反映來确定。【实验材料】1.实验器材试管及试管架；移液管；烧杯；恒温水浴锅；温度计2.实验试剂（1）1%淀粉溶液：将lg淀粉溶解于100ml蒸馅水中。（2）1%酪蛋白溶液：称取酪蛋白1克于研钵屮，先用少量蒸镭水湿润示，慢慢加入0.2mol/LNaOH4ml,充分研磨,用蒸馆水洗入100ml容量瓶中,放入水浴中煮沸15分钟,溶解后冷却，定容至100ml,保存于冰箱内。（3）1/2000碱性蛋白酶溶液：精确称収T•陆粉2克，加入pH10硼砂氢氧化钠缓冲溶液10ml,在小烧杯中溶解，并用玻璃棒搅拌
3、，静止片刻后，将上层液小心倾入容量瓶中，残渣部分再加入少量缓冲液，如此反复搅拌溶解4次，最示全部移入200ml容量瓶屮。用缓冲溶液定容至刻度，充分摇匀，用二层纱布或四层纱布过滤，吸取滤液5M,移入100讷容量瓶屮，用蒸憎水稀释至刻度，所得液为稀释2000倍的酶液。（4）pH10硼砂氢氧化钠缓冲液：甲液（0.05moL/L硼砂溶液）:取硼砂（Na2B407-101120）19克，用蒸馅水溶解并定容至1000mlo乙液：0.2moL/L氢氧化钠溶液。配制PH10硼砂-氢氧化钠溶液：吸取甲液50ml,再加入乙液21m
4、l,用蒸馆水定容至200ml。（5）0.4mol/L碳酸钠溶液（6）0.4mol/L三氯醋酸溶液（7）福林试剂:在1L容积的磨口回流瓶中加入50g餌酸钠（Na2W0.・2出0）、125gffl酸钠（Na2Mo04;2H20）.350ml蒸憾水、25ml85%磷酸及50ml浓盐酸,充分混匀后回流10h。回流完毕，再加25g硫酸锂、25ml蒸憎水及数滴液体漠，开II继续沸腾15分钟，以便驱除过最的漠,冷却后定容到500ml,过滤，置于棕色瓶中暗处保存。使用前加4倍蒸谓水稀释。（8）1/2000淀粉他溶液：用蒸镉水作
5、稀释溶剂，配制方法同碱性蛋白购液相同。（9）碘-碘化钾溶液：称取碘10克，碘化钾20克，同溶于100ml蒸懈水屮，贮于棕色瓶内。使用前稀释10倍。【实验操作】1.取五支试管，编号，按下表加入试剂:试管编号试剂对照1234蒸憾水(ml)2.01.01.01.01%淀粉溶液(ml)1.01.01/2000碱性蛋白酶溶液(ml)1.01.01/2000淀粉酶溶液(ml)1.01.0pH10缓冲液(ml)1.01.将各管充分摇匀后，于40°C水浴小保温15分钟。2.于3、4号管中各加碘溶液2滴，观察实验现象，做好记录。
6、3.于对照管及1、2号管各加入3.0mL0・4M三氯醋酸溶液，摇匀，分别过滤，各吸取滤液1.0ml,加0.4M碳酸钠溶液5.0ml,福林试剂1.0ml,摇匀,于40°C水浴保温15分钟。取出后观察三管的现象，并记录。二、温度对酶活力的影响【实验原理】与人多数化学反应一样，温度对酶活性有显著影响。在一定的温度范围，酶的活性通常随着温度的升高而升高，因为有更多的分子成为活化分子。反之，卜•降。通常'温度每升高10°C,反应速度加快一倍左右，最后反应速度达到最大值。另一方而，酶是一种蛋白质，温度提高可引起蛋白质变性，
7、导致酶活性逐渐丧失。因此，每种酶都冇它的最适温度，即酶促反应速度达最大值时的温度。如果反应温度超过最适温度，随着温度的升高，反应速度逐渐下降，以至完全停止反应。通常酶的最适温度接近于它所存在的生物体的温度，比如，人体中的大多数酶的最适温度是37°C左右。木实验以唾液淀粉酶在不同温度下对淀粉的作用为例，观察温度对酶活性的影响，唾液淀粉酶催化淀粉水解生成各种不同人小分了糊精及麦芽糖，它们遇碘各呈不同的颜色。从而判断淀粉酶是否存在及其酶活性大小。【实验材料】1.实验器材试管及试管架；漏斗；烧杯；恒温水浴锅；温度计2.
8、实验试剂(1)1%淀粉溶液：同酶特异性实验(2)碘■碘化钾溶液：称取碘4克，碘化钾6克，同溶于100ml蒸憎水屮，贮丁•棕色瓶内。(3)稀释的唾液【实验操作】1.漱口后收集哑液，用小漏斗加脱脂棉过滤，用蒸镉水稀释5〜20倍(根据各人的酶活性而定),混匀后备用。2.取试管2支，各加稀释唾液2nd,—•管直接加热煮沸，另一管直冰浴中预冷5分钟。3.另取4支试管，编号序号，按下表添加试剂：步
