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《生物制药专业论文--青霉素结合研究发展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、摘要目录第一章绪论(1)1.1引言(1)1.2青霉素结合蛋白研究发展(1)第二章青霉素结合蛋白测定技术的研究(4)2.1材料与方法(5)2.2结果与讨论(6)致谢参考文献摘要当前，细菌耐药性问题F1趋严重，给临床治疗带來困难，对卜内瞅胺类抗牛素而言，某些菌青痔素结合蛋白(PBps)改变造成的耐药性，是卜内駄胺类抗生素的特点。一般细菌的PBPs均为胞浆膜上的蛋片质，是细菌致死的靶位。它的数目、位置、亲和力的变化造成与卜内瞅胺类抗牛索不易结合而产牛耐药性。人们常采用SDS聚内烯瞅胺凝胶电泳和放射H显影的方法研究PBPs图谱，以便了解敏感菌和耐药菌的区别。所以，PBPs测定技术
2、是研究压内酸胺类耐药性的重要手段［1］。的穿透力弱，用一般放射自显影法不能获得PBPs图谱，需采用荧光闪烁剂增效的“荧光放射自显影法”。国内有关PBps测定技术报道其少，以311标记者更少，木文介绍这一技术。关键词:青霉素结合蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳荧光放射自显影第一章绪论1・1引言青霉素结合蛋口(PBPs)是广泛存在于细菌表面的一-种膜蛋口，是0—内瞅胺类抗生素的主要作用靶位。每个菌种都有一套特杲的PBPs,称PBPs谱。在一种菌种中PBPs按分子量大小排序,分别称PBPT,PBP2,PBP3PBP1为分子量最大的一种。不同菌属PBPs的生理功能很相近，而且分子结构上也有
3、其相关及相似性。PBPs含量很少，仅占细胞膜蛋白总量的1%,不同PBP含量变化很大,如大肠杆菌中高分子的PBPI,PBP2和PBP3量很少,而低分了PBPS和PBP6却占PBPs量的70%—90%。各种PBP与抗生索亲和力相差亦很大。亲和力大小一般用。表示；指使-青霉素G结合减少50%吋该抗生素浓度，其值越高，示药物亲和力越小不同细菌具种类及含量均不相同。但各种菌种的PBPs乂有许多类似的结构与功能，在细菌生长、繁殖屮发挥重要作用。PBPs结构与数量的改变是产生细菌耐药的一个重要机制。60年代，细菌细胞壁的结构被阐明，为人们认识青霉索作用机制及PBPs奠定了基础。1972
4、年Suginak.Blumberg和Strominge:发现青霉素结合蛋白,用放射性同位素标记的青霉素可以标出细菌表血的PBPs,但后來的研究发现并非所有PBP均是青霉素作用的致命靶位。所有细菌都含有多种青霉素结合蛋白，不同菌属其PBPs含量、种类各不相同，不同的抗生素通过与不同的PBP蛋白结合而产生不同的抗菌活性。现今，各类抗生素虽种类繁多，但在耐药菌的治疗中仍缺乏有效手段。因此近年來围绕PBPs开展了人量的研究工作，试图从分子结构少基因水平认识PBPs,探求细菌耐药的机制，企图获得更有效的治疗手段。1.2青霉素结合蛋白研究发展1.2.1各种青霉素结合蛋白研究进展PBP
5、s在不同菌种中各不和同，但対其分子结构，牛:理功能的研究发现每种菌种均有特界PBPs,PBPs的生理功能直接影响与其结合的抗生素的抗菌活性，这方面的研究已积累了大量的资料.但某些问题及研究结果的意义仍不十分清楚，为了研究者能迅速了解这方而研究进展，以下以大肠杆菌和肺炎球菌为例说明研究近况。对大肠杆菌PBPs的研究授早开展，也是研究授多的，比较具冇代表性。大肠杆菌含6种PBP,依次为PBP1,PBP2,PBP3.PBP4,PBPS,PBP6。大肠杆菌PBP1主要功能为维持细胞形态，可分成PBPla,PBPlbs两部分oPBPlbs主要分布于细胞内膜•亦有少部分分布于细胞外膜
6、。是细菌生长的重婆蛋白，与抗生素结合可致细菌快速溶解.最近研究表明，PBPlb是一•种球蛋白，貝有2个密切相关的陆活性区，一为转肚酶活性区(转肚反应是细胞壁合成屮的限速反应)，另一为转糖酶活性区。PBPla具有PBPlbs替代酶的作用。缺乏PBPla的变界株能够存活，说明PBPla为细菌牛长非必需蛋口.用仅冇PBPla,PBPlbs某因或特异性分裂基因ftsA,ftsQ,pbpB,ftsZ变异的细菌株来研究PBPa与PBP1bs的功能时发现:PBPla不能独立维持细胞完整性,需与PBP2,PBP3及ftsQ基因产物一起才能维持细菌存活.而PBPTbs显然较PBPla有更强
7、的生物合成功能，在缺乏PBPla,PBP2,PBP3和ftsQ基因产物时变异株细菌仍能存活，在细菌分裂中，PBPlbs也起着相当作用，与肤聚糖的合成冇关。PBP2能维持大肠杆菌的张力，使菌体保持杆棒状。PBP2仅占PBPs的1%。美西林、克拉维酸和硫得素与PBP2有高度亲和力。与PBP2结合后，可使细菌变成园球体，终致溶解、死亡。有实验表明在缺乏PBP2基因的菌株屮，如能使PPGPP人量表达及分裂蛋白ftsZ,ftsA,ftsQ大量表达，细菌仍能存活并分裂繁殖PBP3与细菌分裂有关。在DNA复制完成后PBP3被激活，并催化梭基
