蝴蝶兰组织培养技术研究

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1、蝴蝶兰组织培养技术研究-、实验目的1・能够止确选取外植体，并最其进行前处理2.能够有效防止外植体褐变的发生。3.能够正确进行继代培养与壮苗正根培养。4.能够利用无菌播种方式进行种子繁殖。5•培养团队精神、责任心和科学的思维能力。二、实验原理随着植物组织培养技术在植物快繁上的应用，近年来，对蝴蝶兰组织培养研究较多的是用胚、幼叶、茎尖和根尖、花梗腋芽等多种器官为外植体进行组织培养研究，曲于所选外植体材料各异，难度也有高低，虽然有些技术已经用于大规模工厂化生产，但仍面临一些困难，有待于进一步探索和完善。根据冃前蝴蝶兰的发展状

2、况，木文将在以花梗侧芽、茎尖、叶片为外植体材料进行组织快繁技术上作深入的探讨和研究。三、实验仪器及试剂花梗腋芽诱导培养基为1/2MS+BA2.5mg/L+NAAO.2mg/L增殖培养基为1/2MS+BA3.5mg/L+KT1.0mg/L+NAAO.5mg/L+椰乳10%。生根培养基为1/2MS+BAI.5mg/L+NAAO.3mg/L+80g/L香蕉泥诱导培养基为1/3MS+NAA0.5〜1.0毫克/升+6-BA3.0〜5.0毫克/升+椰乳15%+蔗糖30克/升+琼脂6克/升，或KC+NAA1.0毫克/升+643A5.

3、0毫克/升+椰乳15%+蔗糖20克/升+琼脂6克/升柠檬酸300毫克/升以上培养基PH均为5.6四、实验步骤与方法（-）花梗腋芽和顶芽组织培养快速繁殖技术蝴蝶兰为总状花序，通常由花梗基部算起在第4或至第7节才会分化花朵。除最基部一节外，剥开位于该节位以上齐节的苞片都可看到腋芽，近顶端的节含有未完全分化的花原始体，花轴基部的芽往往为休眠芽，常具有苞片覆盖，连同花序的顶端，都是花梗腋芽组织培养的好材料。1.花梗腋芽的培养途径对花梗腋芽有两条培养途径，一是切取带腋芽的花梗茎段培养；二是不带花梗组织剥取茎尖生长点培养。其屮采用

4、腋芽茎段培养，促使休眠芽启动向营养芽转化,尔后采用丛生芽方式直接增殖，从而不通过脱分化形成原球茎阶段，可以减少变界，保持母株优良特性，但增殖速度相对后者较慢。2.外植体取材、消毒和接种2.1操作程序2.1.1从蝴蝶兰出现花梗到花朵凋谢，在花梗尚未枯黄前，都可用来作为外植体。剪下來的花梗，用75%乙醇的棉化球将花梗外表的灰尘、杂物等擦拭干净,然后以节为单位切成段，含芽的花梗时上下留不同长度，置于超净工作台上，准备消毒。2.1.2将花梗腋芽上的的苞叶去除，并用解剖刀把节与芽相接处清除干净。另外，若在花梗表面有病斑或焦枯的部

5、分，应以解剖刀削去。2.1.3一般花朵盛开或己凋谢的成熟花梗，在0.l%IlgC12-吐温80溶液中消毒10〜15分；如果是较嫩的组织，消毒时间缩短为8〜10分钟。2.1.4消毒时间到时，材料取出置于盛有无菌水烧杯屮，无菌水荡洗3~5次。2.1.5将冲洗后的外植体置于无菌的培养皿中，用锐利的解剖刀截去两端与消毒液接触部分，取出中间部分插入诱导培养基中。花梗初次接种于诱导培养基上，附加不同浓度的BA、NAA、胰蛋口月东或椰乳能提高诱导率。另外添加柠檬酸300毫克/升防止褐变，调节PII至5.6,通常可以获得满意效杲。诱导

6、蝴蝶兰侧芽萌动的影响因素，主要集中在培养温度，腋芽节位和激素浓度等方而。蝴蝶兰花梗诱导培养操作时，培养室温度为25±rc,光照强度1500勒，每天光照10~16个小时。通常花梗侧芽在适当培养基上培养厂10天后，腋芽突出肥人，经过15天后，腋芽萌发，可达1厘米以上不定芽。细胞分裂素BA有利于营养芽萌发，在28°C培养条件下，诱导率随BA浓度升高而提高，其中添加5毫克/升BA,花梗各部位的腋芽绝大多数发育为营养芽。此外，生长素的存在对腋芽诱导也有显著促进作用。蝴蝶兰花梗腋芽诱导从生芽的较好培养条件是在25°C〜28°C进行

7、光照培养，光照度为1500勒左右，培养基中添加1〜3毫克/升BA和1.0毫克/升的NAA。一般接种7天后，外植体萌动、膨大并向外仲长，30天后长出小叶，50天左右可长出4~5片叶。而花序顶端小芽的启动较慢，40~50天后才见小叶萌发伸展。当在试管内长成无菌植株，便于进一步利用，如取无菌试管苗的叶片、茎尖或根尖进行培养，建立无性繁殖体系。4.继代培养将诱导产生的芽或芽丛从花梗上切离，转入继代增殖培养基上培养，一般每瓶接种6〜10株无根苗。培养条件与诱导相同，也可以将激索浓度和配比稍做调整,主要取决于不同品种而已。一般可以

8、适当调高细胞分裂素的浓度，降低或不用生长素，如仅添加6〜BA3~5毫克/升。影响蝴蝶兰丛生芽继代培养效果的条件和因素主耍是生长调节剂种类和浓度、有机物添加种类等。细胞分裂素有利于芽的增殖，在BA浓度广20毫克/升范围内增殖率随BA浓度上升而增加，但是BA浓度过高会使芽的生长减弱。另外，培养基屮添加椰乳能明显提高蝴蝶兰从生芽的增殖率