细菌内毒素检查操作规程

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1、细菌内毒素检查操作规程*******制药有限贲任公司U的：建立一个规范的细菌内毒素检杳操作规程。范I韦I：木规程适用于细菌内毒素检查。职责：牛•物检测人员対木规程实施负责。内容：1准备工作1.1设备用具的洗涤及除热原1・1・1设备与用貝刻度吸管（1、2、5.10ml）.10mm375mm试管、试管架、不锈钢盒（或铝饭盒）、不锈钢筒（或铝筒）、洗耳球、电热干燥箱、恒温水浴箱、定时钟、电冰箱、旋涡混合器。1.1.2洗涤及除热原所用的玻璃器皿，先用自来水冲洗，再浸泡在洗液屮过夜，収出后用自来水冲洗至pH中性，再用注射用水冲洗三次。将刻度吸

2、管放入金属筒内，试管、小瓶等放入金属盒内，于250°C十烤至少60分钟，也可采川其其它确证不十扰细菌内毒素检査的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒索并冃对试验无干扰的器械。1.2试剂与标准品1.2.1内毒素检查用水（即无热原水）,为内毒素含量不超过0・015Eu/mL的灭菌注射用水。1.2.275%酒精棉。文件名称细雷i内毒素检査操作规程编号编制者审核者批准者编制日期审核日期批准日期编制依据版本号颁发部门制作备份分发部门实施日期第1页共4页细菌内毒素检杳操作规程1.2.3细菌内毒索丁作标准品

3、，系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，川于试验屮的赏试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。由中国药品生物制品检定所标定和供应。1.2.4供试品溶液的制备：某些供试詁需进行复溶，稀释或在水性溶液屮浸提制成供试詁溶液。-•般要求供试詁溶液的pH值在6.0-8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液(或具稀释液)的pll值，町使川酸、碱溶液或蜜试剂生产厂家的推荐的适宜的缓冲液调节pH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器屮配制。缓冲液必须经过验证不含内毒索和干扰因子。内毒索限值的确定：

4、药品、生物制品的细菌内犧索限值(L)一般按以下公式确定：IfK/M式中：L为供试品的细菌内毒素限值,以EU/ml、EU/mg或EU/U(活性单位)表示;K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg2h)表示，注射剂K=5EU/(kg2h),放射性药品注射剂K二2.5EU/(kg2h),鞘内用注射剂K=0.2EU/(kg2h)；M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量,以ml/(kg2h)>mg/(kg2h)或U(kg2h)表示，人均体重按60Kg计算,注射时间若不足1小时,按1小时计算。按人用剂量计算限值时，如遇特殊

5、情况，可根据生产和临床用药实际情况做必耍调整，但需说明理由。确定最大有效稀釋借数(MVD)最大有效稀釋借数是指在试验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限値的检测。用以下公式來确定MVD：fVD=c21/X式中L为供试品的细菌内莓素限值；C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则c等于l.Oml/ml,当I,第2页共4页细菌内毒索检杳操作规程以EU/mg或EU/U表示时，c的单位需为mg/ml或U/mlo如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD取1,可计算供试品的最小有效稀解浓度c=X/L

6、；X为在凝胶法屮蛍试剂的标示灵敏度(EU/ml),或是在光度测定法屮所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。1.2.6蚩试剂，应具有国家主管部门的批准文号。为冻T•品，规格有0.1ml/支和0.5ml/支两种。在使川新一批的蜜试剂前，必须进行蜜试剂灵敏度复核实验。药典小己有规定的品种或有其他内毒索检验标准的品种，可直接进行内毒索检查，如在检验屮出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒索检杳的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。细菌内毒素检查过程中的阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行，否则实验结

7、果无效。2.供试品测定按卜•表制备溶液A、B、C和D。使用稀释倍数为MVD并且已经排除干扰的供试胡溶液来制备溶液A和B。溶液的制备编号内毒素浓度/配制内毒素的溶液平行管?A无/供试品溶液2B2A/供试品溶液2C2A/检査用水2D尢/检查用水2注：A为供试品溶液；B为供试品阳性对照：C为阳性对照；D为阴性对照。根据蛍试剂灵敏度的标示量(入)，将细菌内壽索国家标准品或用细菌内壽索检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后按上表制备供试品阳性对照与阳性对照，每稀释一步均应在旋涡混介器上混匀30秒钟。取卷试剂复溶后的0.1讷/支规格的卷

8、试剂原安瓶8支，其中4支屮2支分别加入0.1ml2X的内毒索标准溶液与2支0.Iml2X的供试品溶液，另外4支中2支管加入0.1ml.第3页共4页细菌内毒素检查操作规程细菌内毒索检杳用水与2支0.1ml的供试品溶液。将试管屮溶液轻轻混