玉郎伞多糖分离纯化及组成性质探究

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1、玉郎伞多糖分离纯化及组成性质探究作者：林兴蒋伟哲焦杨张士军李江黄仁彬【摘要】目的从玉郎伞(YLS)中分离出玉郎伞多糖，并对其化学组成进行研究。方法YLS经醇提后的药渣用热水提取,乙醇沉淀，Sevag试剂脱蛋白，采用DEAE纤维素(DEAE52)柱层析分离纯化，气相色谱和薄层色谱分析其组成。结果分离得到的YLS多糖经Sephadex75凝胶柱层析，硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)证实为单一多糖，紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰，薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成。结论YLS多糖首次从YLS中提取获得，为YLS

2、主要成分之一。【关键词】玉郎伞多糖分离纯化组成玉郎伞(YLS)原植物经考证为蝶形花科植物疏叶崖豆M订lettiapulchraKurzvarlaxior(Dunn)乙Wei的块根。民间常用于高血压病、跌打损伤和风湿病的治疗，也用于治疗智力减退、消化不良、营养不良和病后虚弱等。药理实验表明，YLS多糖能明显延长小鼠游泳时间、耐缺氧时间及耐髙温时间，显著提高小鼠血清SOD、GSHPx活性及减少MDA含量，具有较好的抗衰老作用［1］。本实验对YLS多糖作了分离纯化并对其组成性质进行研究。现报道如下。1材料与仪器1.1材料与试剂玉郎伞饮片，购

3、于南宁医药公司；D木糖，生化试剂，上海伯奥生物科技有限公司，批号011130；L(+)—鼠李糖，生化试剂，北京化学试剂公司，批号011204；阿拉伯糖，生化试剂，武汉生命技术有限公司，批号030625；葡萄糖，分析纯，上海伯奥生物科技有限公司，批号030305；D(+)半乳糖，生化试剂，sigma,批号B002211oDEAECellulose52,whatman批号010410；SephadexG75,pharmacia,批号：279867；胰蛋白酶，美国sigma,批号030409o用于气相色谱分析的试剂均为色谱纯，其余试剂为分析

4、纯。1.2仪器1525WATERS高效液相色谱仪，美国WATERS公司；4890D气相色谱仪，美国Agilent公司；TU1800SpC紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。2方法2.1粗多糖的提取玉郎伞饮片粉碎后，加70%乙醇回流提取除去脂溶性杂质，药渣加蒸馆水煮3次，3h/次，合并滤液，离心分离，浓缩至适当体积，加入5倍量95%乙醇，醇析24h,过滤，依次用95%乙醇、丙酮洗涤多次，沉淀物加蒸饱水溶解，加入适量胰蛋白酶，摇匀，37£水浴保温12h,采用Sevage法除去蛋白[2],药渣用蒸憎水溶解，透析48h,除去小分

5、子杂质及色素，透析后浓缩至适当体积，加5倍无水乙醇，醇析8h,收集沉淀物，真空干燥得YLS粗多糖。2.2多糖纯化YLS粗多糖适量，加蒸億水溶解，上已处理好的DEAE52纤维素(0H,400mmX26mm)柱层析，用蒸彳留水洗脱，流速分部收集，每管5ml,用硫酸苯酚法显色[3,4],收集合并含糖洗脱液，用旋转蒸发仪蒸干洗脱液，得白色YLS多糖。2.3多糖的纯度鉴定紫外光谱：取上述分离纯化后的多糖，配成0.1%水溶液,在TU1800SpC紫外可见分光光度计对200〜400nm区间扫描。凝胶柱层析：YLS多糖经SephadexG75柱层析，

6、蒸馆水洗脱，流速0.1ml/min,每管1ml分部收集，苯酚硫酸显色，以管号为横坐标，光密度为纵坐标，根据分部收集中出现的峰数和形状断定多糖的纯度。高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)[5]：美国Waters高效液相色谱仪，2410示差折光检测器(附加GPC软件)。色谱柱为日本T0S0H公司TSKgelG3000pWxl凝胶色谱柱(300mmX7.8mm),流动相为0.7%硫酸钠水溶液，流速0.6ml•min-1,柱温35°C,进样量20ulo2.4多糖的组成分析薄层色谱分析［6,7］：将60mgYLS多糖加入8ml2mol-1-1的硫酸

7、中，加入N2除02封管，1051烘箱中水解8h,水解液用饱和Ba(0H)2溶液中和，离心去除BaS04沉淀，上清液减压浓缩至干，得多糖水解物备用。取1%的多糖水解物于高效硅胶G薄层板(10cmX20cm)上点样，以标准单糖为对照。展开系统：醋酸乙酯：异丙醇：乙酸：水=11：4：4：1(V/V)显色：10%硫酸乙醇溶液，喷雾后于105°C加热10mine气相色谱分析［4,6,8］：取上述水解多糖30mg按下列步骤进行，加入30mg盐酸轻胺和1.0ml毗喘于90°(2恒温水浴中振荡，加热反应30min,取出冷却至室温，加入1.0ml醋酸酉

8、匕于90°C恒温水浴中乙酰化30min,生成具有挥发性的糖騰乙酸酯衍生物。反应产物用旋转蒸发仪蒸干，残渣用2ml氯仿溶解，取样，进行气相色谱分析，以标准单糖衍生物为对照。色谱条件：HpAgilent4890D气相色谱仪。