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1、海蚩酶解多肽制备及其抗肿瘤活性探究作者：龙吟杨永芳甄茹陈鹏申林严容芳丁国芳【摘要】目的研究海董活性肽制备与抗肿瘤活性。方法海董先经正交试验确定最佳酶解条件，然后将酶解物离心得到海蚩活性肽粗品。粗品经超滤、SephadexG-15凝胶层析、冷冻干燥纯化得到海玺抗肿瘤活性肽，通过MTT法及AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞测定了其对肿瘤细胞体外增值的影响。结果碱性蛋白酶在温度为55°C,料液比为1:2,加酶量为1000U/g,时间为4h的酶解条件下对海堇进行酶解，酶解液中的氨基氮含量为41.3mg/100mlo从海堇中分离纯化得到活性肽，MTT法表明：其对肿瘤
2、细胞的增殖有较强抑制作用，且抑制作用具有明显量效依赖关系；AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术显示该肽可诱导肿瘤细胞凋亡。结论经碱性蛋白酶酶解制备的活性肽对肿瘤细胞有明显的抑制作用，并能诱导肿瘤细胞凋亡。【关键词】海玺酶解抗肿瘤活性活性肽【Abstract】ObjectiveTopurifytheanti-tumoractivitypeptidefromjellyfish(Rhopilemaesculentum).Methods：First,theorthogonalexperimentwasadoptedtoproductthecrudepeptidef
3、romjellyfish・Then,crudeproductwasisolatedbyultrafiltration,SephadexG-15gelchromatographyandantitumoractivitypeptidewasobtainedatlast・Last,MTTmethodanddouble-labeledflowcytometryAnnexinV-FITC/PIwasusedtodeterminedtheantitumoractivityofpeptide.ResuItsUsingalkalineproteaseatatemperatureof5
4、5°C,withthewaterratioof1:2,enzymeamountof1000U/g,hydrolysistimewas4htoenzymejellyfish,andthehydrolyzateaminonitrogencontentedintheproductis41.3mg/100m1.Purifiedfromthejellyfishinavarietyofactivepeptides,MTTmethodshowedthatitseffectontumorcellproliferationwasstronglyinhibitedandtheinhibi
5、tionhasasignificantdosedependent,andAnnexinV-FITC/PIdouble-labeledf1owcytometryinducedapoptosisofthetumorcellsandapoptosisinadose-dependent.ConclusionThepeptidefromjellyfishhydrolysatecouldsignificantlyrestraintumorcellsmultiplicationandinducetumorcellsapoptosis・[Keywords]jellyfishenzym
6、eanti-tumoractivityactivepeptides海蜚(Rhopilemaesculentum)俗称"鮮鱼”,隶属于腔肠动物门(Coelentera)、钵水母纲(Scyphozoa)、根口水母目(Rhizostomeae)、根口水母科(Rhizostomatidae),海堇属(Rhop订ema)的无缘膜动物。海堇的蛋白占其干重的50%,其氨基酸成分种类繁多，必须氨基酸含量丰富。海堇等海洋生物为了适应高盐、高压、低温、缺氧等极端的海洋生活环境，其蛋白质的氨基酸组成与序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，在种类和数量上也远远超过陆地蛋白资源。在种类繁多的海洋生
7、物蛋白氨基酸序列中，潜在着许多具有生物活性的氨基酸序列，用特异的蛋白酶水解，就能释放出有活性的肽段。抗肿瘤肽是一种具有抗肿瘤效果的生物活性肽(biologicallyactivepeptides,简称BAPP)o目前已从海绵、海鞘、海兔、海藻、海苔虫、鲨鱼、珊瑚以及海洋微生物中分离出2万余种天然产物,其中不少化合物显示出明显的抗肿瘤活性，一些化合物已被作为抗肿瘤候选药物进入了临床前或临床研究阶段［1-3］o但海董抗肿瘤活性肽的研究尚处于空白，对其深加工技术与理论也甚少有研究［4］。因此，本研究拟利用浙江沿海丰富的水产品资源，运用最新的蛋白质提取及纯化
