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《槐角染料木素对哮喘小鼠的治疗作用和机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、槐角染料木素对哮喘小鼠的治疗作用和机［摘要］目的探讨槐角染料木素对哮喘小鼠白介素-5（IL-5X白介素-13（IL-13）含量的影响。方法32只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组（n=10模型组（）和干预组（n=11）0模型组和干预组采用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）腹腔注射致敏和雾化吸入激发，建立哮喘小鼠模型。干预组于激发前腹腔注射染料木素30mg/kgo观察小鼠哮喘症状的发生情况，检测小鼠血清OVA特异性IgE水平。检测肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)
2、计数及其分类比值和细胞因子IL-5.IL-13含量。结果与模型组相比，干预组小鼠哮喘症状出现较迟，且症状较轻微。与对照组相比，模型组BALF中EOS计数及分类比值、IL-5和IL-13的含量及血清中OVA特异性IgE水平均明显增加（均P1材料与方法1.1主要仪器JJ200电子秤,YLS-8A多功能诱咳引喘仪,Sysmex-XT2000i全血细胞分析仪,Luminex200液相芯片分析系统，美国Bio-TEKELx508自动洗板机，美国Model680伯乐酶标仪1.2主要试剂染料木素(大连美仑生物技术有限公司),卵清清蛋白OVA(Sigma,SLBB434
3、0V),白细胞分类染液(Sysmex,A5005),血红蛋白溶血素(Sysmex,A5005),嗜碱细胞溶血素(Sysmex,R5036),白细胞溶血素(Sysmex,R5019),PK-30LCELLPACK稀释液(Sysmex,G5248),MouseIL-5simplex(eBioscience,117633009),MouseIL-13simplex(eBioscience,115826007),抗・OVAIgE试剂盒(eBioscience,102715)1.3实验动物及饲养6~8周SPF级BALB/c雌性小鼠32只，购自广东省医学实验动物中心
4、，质量合格证:No.44007200022603o按照广东省动物实验监测所啮齿类接收、适应及检疫操作规程(VET-003)和实验动物饲料、垫料和饮水的质量控制操作规程(LA-ADM006,LA-ADM007,LA-ADM008)操作。动物饲养于屏障动物实验室，实验动物使用许可证编号:SYXK(粤)2012-0122,IACUC审批编号：2015015。每日室温控制为20〜269,湿度控制为40%~70%。SPF级鼠饲料购自北京科澳协力饲料有限公司，饮用消毒纯水，每日足量供给1.4实验方法1.4.1动物分组32只小鼠随机分为对照组（10只）.哮喘模型组（简
5、称“模型组”，"只）及染料木素给药干预组（简称“干预组”，笛只）1.4.2动物致敏模型组和干预组分别于第1.15天致敏,每次每只小鼠腹腔注射致敏液0.2mL（OVA溶液的配制：OVA10mg加生理盐水10mL,氢氧化铝40mg加生理盐水10mL,两者等体积混匀，0.22pm滤器过滤对照组于相同时间腹腔注射等量生理盐水1.4.3动物激发模型组和干预组小鼠于实验第22天起,每日雾化吸入5%OVA激发液，每次30min,连续14d。干预组并于每次雾化前30min给予腹腔内注射染料木素30mg/kgo对照组于相同时间雾化吸入等量生理盐水1.5观察指标1.5.1
6、哮喘症状观察观察各组小鼠每次激发后症状及体征变化，如精神状态、呼吸频率、大小便失禁及抽搐等情况。并参照王力宁等［X］的方法，对小鼠哮喘症状进行评分，分值越高表示哮喘症状越重。见表11.5.2血清中Anti-OVAIgE水平检测小鼠摘眼球取血200
7、JL,离心后取血清，用ELISA法检测Anti-OVAIgE水平,操作严格按说明书进行1.5.3支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数及其分类比值分析和IL-5.IL-13含量检测小鼠处死后，行气管插管，在右主支气管处结扎右肺，用0.3mL冰PBS分3次灌洗左肺并回收支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar
8、lavagefluid,BALF),采用Sysmex-XT2000i全血细胞分析仪分析BALF中嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)计数及其分类比值,Luminex200检测BALF中IL-5、IL-13的含量1.6统计学方法采用SPSS13.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数士标准差(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-Q检验，以P3讨论Th1/Th2细胞功能失调、Th2活化与细胞因子分泌亢进是哮喘发生发展的重要基础［12］0细胞因子是炎症细胞释放的肽类炎性介质，有调控细胞的生长、增殖和分化功能，其中，
9、白细胞介素(interleukin,IL)是重要的一类细胞因子口3］。IL-5是
