植物检疫实验指导正式合订本

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1、河南科技学院植物病理学教研室&昆虫学教研室2005.08说明《植物检疫学实验指导》是根据植物保护专业教材《植物检疫学》所涉及的内容编写的。目的是使学生通过实验实习操作，加强理论与实际联系，巩固和丰富理论教学，培养学生从事植物检疫工作的基木操作技能和独立工作能力。木书课内实验主要内容包括植物检疫性病害及其病原检测方法和植物检疫性虫害识别两大部分。植物检疫性病害识别是植物保护专业学牛必须掌握的基础知识；种子带菌检测是植物检疫重耍工作内容2—。要求学牛在掌握必要的基础知识和基木技能的前提F,熟练实验操作，完成病原检测工作。检疫性昆山的识别在植物检疫工作中是基本的专业要求，主要

2、利用实体显微镜进行观察操作，必要的描述和绘图是害虫形态学习研究不可分割的一部分，要求学生熟悉检疫上重要的属级分类阶元。山于编者水平有限，时间仓促，错误和不足之处在所难免，敬请各使用本指导的教师和同学捉出宝贵意见，以便改进。编者实验一洗涤法检测种子表而真菌抱子一、H的要求通过实验，掌握洗涤法检测种子表血真菌砲子、细菌或颖壳上病原线虫的方法；学习血球计数板使用方法，并通过抱子形态观察鉴定真菌种类，从而为检测种子表而粘附的检疫性真菌奠疋基础。二、仪器用品离心机、三介瓶、显微镜、移液管三、实验材料小麦种子、水稻种子、玉米种子四、方法步骤1.孑包子的洗脱。从种子样品屮取200粒，

3、放入三角瓶中，加入无菌水100mL,振荡5min,使附着在种子表而的砲子洗下來。可在无菌水中加入04%的肥皂溶液或吐温20,使种子表而粘附的真菌袒子充分洗脱下來。2.砲子悬浮液的浓缩。把洗涤后的悬浮液分别加到洁净的离心管中，3000r/min离心20min,使病原物完全沉于管底，再用橡皮管吸去上清液，仅附ImL悬浮液于管底，然后加2mL乳酸酚固定液。用手振动离心管使病原菌重新悬浮起來，将几管合并，用干净的玻璃棒，将悬浮液滴于血球计数板上，在显微镜下检查，鉴定病原物种类，并计算每粒种子上的砲子负荷量。3.镜检及记数。在显微镜下检查血球计数板80个小方格中的沦子数量，求出每

4、个小方格内的沦子平均数量，再乘以4000000即为ImL悬浮液中他子数量。此数即为100mL悬浮液屮殖子数量，除以洗涤液内种子总数童，即可获得每粒种子上的砲子负荷量。五、实验作业分别检测小麦、水稻和玉米种子表面的砲子种类及他子负荷量，并绘图描述砲子形态。实验二保湿培养法检测种子表而真菌一、目的要求通过实验拿握保湿培养法检测种传真菌病害的方法，并通过抱子形态观察鉴定真菌种类，从而为检测种子表面粘附的检疫性真菌奠定基础。二、仪器用品培养皿、吸水纸、显微镜三、实验材料小麦种子、水稻种子、玉米种子四、方法步骤1.用三层无菌吸水纸，吸足无菌水后，放入经消毒的直径9O.cm培养JJ

5、J1中，然后将种子排列在吸水纸上，种子间保持一定距离，不得少于lcm,每皿放25粒种子。2.将培养川I置于20〜28°C的恒温培养箱中，保持空气相对湿度95%〜100%。在培养期间用12h光照和12h黑暗交替处理。经过3d〜7d左右，种子表面长出真菌显微镜下检查，根据菌丝和砲子形态鉴定真菌种类。五、作业分别检测小麦、水稻和玉米种子表而的真菌种类，并绘图描述砲子形态。实验三试管幼苗症状法检测种子表面真菌一、目的要求通过实验掌握试管幼苗症状法检测种子表而及内部真菌，并通过抱子形态鉴定真菌种类，从而为检测种子表而粘附的检疫性真菌奠定基础。二、仪器用品试管、显微镜三、实验材料水

6、琼脂、小麦种子、水稻种子、玉米种子四、方法步骤1.取160mmX16mm的人型试管若干支，配制1%水琼脂培养基，每支试管装10mL,灭菌后摆成60°的斜而，待培养基凝固后，每支试管内放入1粒种子，塞紧管口。2.将装有种子的试管置于20°C,按照12h：12h,用人工光照和黑暗处理。4〜5d后，当幼苗达到试管顶部时，即可将管盖取掉，检查幼苗症状及病原菌菌丝或施子，鉴定真菌种类。五、作业分别检测小麦、水稻和玉米种子表血的真菌种类，并绘图描述砲子形态。实验四种子内部真菌分离检测一、目的耍求通过实验掌握分离种子内部真菌的方法，并通过抱子形态鉴定真菌种类，从而为检测种子内部携带的

7、检疫性真菌奠定基础。二、仪器用品无菌水、75%酒精、升汞、解剖刀、培养皿、PDA培养基、研钵、PBS缓冲液、显微镜三、实验材料小麦种子、水稻种子、玉米种子四、方法步骤1.种子经流水冲洗2h,70%酒精浸5min后，用0.1%升汞处理5minM行表而消毒，无菌水冲洗3次，最后一次冲洗液涂抹PDA平板，26〜28°C下培养2〜3d,检验表而灭菌效杲。平板上无菌生长，证实表而灭菌彻底。2.取经检验表血消毒彻底的种子材料lg于无菌研钵中，剪碎，加灭菌的PBS缓冲液10mL研磨，将上淸液稀释100倍,取O.lmL涂布PDA平板，置于26〜28°C•