生殖支原体检测方法探究进展

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1、生殖支原体检测方法探究进展自Tully[1]等1981年首次从非淋菌性尿道炎男性患者的尿道分泌物中分离培养出2株生殖原体(Mycoplasmagenitalun.Mg)以后，许多学者对Mg的生长特性、免疫学特性、分子生物学特性以及与疾病的关系等进行了大量的研究并建立了多种Mg的检测方法，本文就Mg的检测方法研究进展进行简要综述。1分离培养法1.1培养基培养[1,2]Mg对培养基要求极高且生长缓慢，培养较难，尤其是临床标本中Mg的培养更不容易成功.Tully1981年建立了对医学支原体具有重要意义的SP-4培养基•适合于Mg生长的SP

2、-4培养基，不含醋酸牠，含Mg代谢所需的葡萄糖及其它营养成份，最适pH为7.4-7.5,可通过加入0.8%Noble琼脂或0.50.6%琼脂而固体低用于克隆菌株，观察菌落,Tully等利用这种培养基，从13份尿道分泌物标本中分离培养获得2株Mg,培养期约为50天1996年Jensen等还报道了另一种适合Mg生长的培养基，即改良Friis肉汤培养基，"份PCR检测Mg-DNA阳性的尿道分泌物标本中有6份在其中呈阳性生长。国内学者对SP-4培养基进行了改良。赵季文等［4］利用改良的SP-4培基从性病及性乱人群中分离Mg获得成功,初代生长

3、时间在30天以上，平均为37.83天，最长为55天。1.2组织细胞培养法组织细胞培养支原体，可为支原体提供良好的类似体内的生长环境。早在60年代,Chanock等［5］报道了肺炎支原体（Mp）在组织细胞中的生长。90年代，Jensen等［3,6］开始尝试用细胞培养法来进行Mg的繁殖，并借此在电镜下观察到Mg侵入细胞的过程以及在细胞内的定位。在PCR的监测下，Jensec发现在"分PCR检测MgDNA阳性的尿道标本中，有9份适应在Vero细胞磁头中增殖，经过多次传代培养后转入改良的FriisfF肉汤培养基中，有6份能继续传代生长，最终

4、在琼脂培养基中克隆获得4株。Jensen认为，在分离获得新的Mg株方面，细胞培养繁殖过程起到了三方面的作用，一是使临床标本中的Mg逐渐适应在人工培养基中生长，二是增加了接种于支原体肉汤培养基中的支原体数量，三是提供持续的接种源。2血清学方法根据Mg的免疫学特性，人们建立了用检测Mg抗体和检测与鉴定Mg抗原的血清学方法。Furr等［7］于1984年详细报道了检测Mg抗体的MIF技术。Moller等对31例未检测出Ct和Mh血清抗体的急性盆腔炎患者，用MIF检测Mg抗体，发现其中大约40%在发病后一个月内抗体滴度有4倍或4倍以上的改变。

5、Taylor-Robinson等［9］报道应用间接MIF检测NGU患者Mg抗体，认为间接MIF试验是一种具有足够敏感性、特异性和简便易行的检测方法。Jensen等曾用EIA检测有尿道炎症与无尿道炎症状的男性STD患者急性期血样标本中Mg抗体,结果发现反应性较弱，且与Mp存在广泛的交叉反应。根据特异性抗体能阻止支原体的生长及代谢这一特性,可采用已知高价血涉及进行祖先生长及代谢抑制试验以鉴别支原体［11］o赵季文等曾采用MIT鉴定所分离获得的Mg暴露于支原体表面的脂结合膜蛋白（lipid-associatedmembraneprotei

6、ns,LAMPs是一种支原体种属特异性抗原，有高抗原性，且不同菌株的支原体，其LAMP抗体具有高度种属特异性，与其它种属无交叉反应口2,13]o）因此提取Mg的LAMP建立ELISA方法检测Mg抗体，可消除Mg与Mp之间的交叉反应。3分子生物学方法DNA探针和聚合酶链反应（PCR）检测Mg的方法,克服了前两类检测方法的弊端，为研究Mg与疾病的病因学关系提供了有力的手段。3.1DNA探针技术1987年Hyman[14]用PUCB载体构建成Mg基因文库，并从中筛选制备出特异性DNA探针,通过斑点杂交，可检测仅含0.1ng的特异性支原体D

7、NA,即105CFUo3.2聚合酶链反应（PCR）技术PCR是一种新的基因诊断技术，灵敏度高，特异性强，且快速、简便。1990年,PCR技术开始在医学支原领域应用。早期的引物多参照菌体末端特异性粘附蛋白的DNA序列而设计。Palmer等体外扩增Mg粘附蛋白的部分核昔酸序列，3株Mg均岀现37bp的DNA片断，并证明PCR技术可检测到10-15g的mg-DNA,其引物序列的:mg1:5JTGTCTATGACCAGTATGTAC3,mg2:5,CTGCTTTGGTCAAGACATCA3J1991年Jensen等［16］根据Mg的粘附蛋白

8、基因设计合成了如下组引物：mgPa-15'AGATGATGAAACCCTAACCCCTTGG3JmgPa-15GACCATCAAGGTATTTCTCAACAGC3'mgPa-15CCGAGGGGTTTTCCATTTTTGC3J用MgP