高_低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定法及技术要求

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1、DOI:10.13602/j.cnki.jcls.2002.06.001临床检验杂志2002年第20卷第6期ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience,2002,Vol.20,No.6325文章编号:1001-764X(2002)06-0325-04中图分类号:R446.1文献标识码:A高、低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定法及技术要求鄢盛恺(中国医学科学院、中国协和医科大学、北京协和医院检验科,北京100730)关键词:高密度脂蛋白胆固醇;低密度脂蛋白胆固醇;匀相测定法流行病学与临床研究证

2、实,动脉粥样硬化(AS)、冠心病目前广泛使用的匀相测定法。的发生率与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相1.2匀相测定法关,而与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平呈正相关。美国1.2.1选择性抑制法(polyanionpolymer/detergentHDL-C[2,4,9,10]国家胆固醇教育计划(NCEP)成人治疗专家组(ATP)新近发assay,PPD法)亦称选择性遮蔽法。其应用两种不表的第3版文件(ATPⅢ,2001年)修改了血脂、脂蛋白水平同的表面活性剂及多聚阴离子,根据脂蛋白的酶反应选择异常的分类,低

3、HDL-C[<1.04mmol/L(40mg/dl)]是冠心性,直接测定HDL-C。试剂Ⅰ中含多聚阴离子和分散型表面病的主要危险因素,而高HDL-C[≥1.56mmol/L(60mg/活性剂(亦称反应抑制剂),CM、VLDL、LDL在多聚阴离子环dl)]被认为是负危险因子,具有保护性。将LDL-C新划分为境下发生凝聚;由于反应抑制剂与CM、VLDL、LDL的疏水5个水平,仍以降低LDL-C水平作为冠心病防治的首要目性基团具有高度亲和力,故其吸附在凝聚的脂蛋白颗粒表面[1]标。近年来国内外相继研制开发出一些新型HDL-C、形成

4、遮蔽圈,抑制其表面的游离胆固醇反应。同时在游离的LDL-C的直接测定方法即匀相测定法(homogeneousHDL表面也吸附有少量反应抑制剂,但由于亲和力较弱,其methods)试剂,因其简便、快速,易于自动化,已引起关注并结合是可逆的。试剂Ⅱ中有对HDL颗粒中亲水性基团具高[2～5]广泛应用于临床常规分析。亲和力的可溶性表面活性剂(亦称反应促进剂),其对HDL1HDL-C检测方法表面的吸附不仅置换出第一反应中HDL表面吸附的反应抑1.1概述测定血清HDL-C通常需根据各种脂蛋白的密制剂,而且使HDL形成可溶性复合体,从而使

5、HDL-C可直度、颗粒大小、电荷等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学接与酶试剂[含胆固醇酯酶(ChER)、胆固醇氧化酶(ChOD)或免疫沉淀法将HDL与其他脂蛋白分离开,再测定HDL组等]发生反应。该方法的主要代表试剂盒为日本第一化学分中胆固醇含量。美国疾病控制与预防中心(CDC)测定(DaiichiPureChemicalsCo.)CholestestHDL和美国GenzymeTMHDL-C的参考方法(RM法)为超速离心法,也为NCEP所推Diagnostics公司的N-genousHDL-C试剂盒。荐。此法主要用于靶值

6、的确定及各种HDL-C检测方法学评1.2.2PEG修饰酶法(PEG-modifiedenzymeHDL-Cassay,[2,4,11]2+价。CDC胆固醇参考方法实验室网络(CRMLN)近来选用了PEGME法)在Mg的存在下,α-环糊精硫酸盐与一种“指定的比较方法”(DCM法)作为转移CDC参考方法CM、VLDL、LDL形成可溶性复合物。这些复合物能抵抗变2+准确性的适用方法———硫酸葡聚糖-镁(DS50-Mg)沉淀结构酶的作用;PEG6000或葡聚糖右旋糖苷与ChER和ChOD合ALBK法。这种方法相对CDC参考方法而言,

7、已大为简共价结合,引起酶的变构,变构酶对脂蛋白的大小和/或电荷[6]化。色谱法和电泳法临床常规实验室应用较少,多用于脂具有选择性,其顺序依次为LDL

8、代表性试剂盒有日本协和(KyowaMedex2+2+2+某些两价阳离子(如Mg、Ca、Mn)合用。最早为美国Co.)、罗氏诊断(RocheDiagnostics)和德国CentronicGmbH国立卫生研究院(NIH)所采用的肝素-锰沉淀法,后多采用公司的产品。2+2+DS50-Mg法,欧