啤酒酵母RNA降解产物5核苷酸高效液相色谱分析

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1、维普资讯http://www.cqvip.com塑垫!篁塑璺篁!塑：坚二GSCIENCE＆TECHNOLOGY2008No．3(To1．165)鹾啤酒酵母RNA降解产物5’一核苷酸的高效液相色谱分析田宝勇，赵星洁(河北科技大学河北省分析测试研究中心，河北石家庄050018)摘要：研究了高效液相色谱法同时测定啤酒酵母RNA降解产物4种5’一核苷酸的适宜条件。应用HypersilODS2色谱柱，在260hill检测波长下，以0．08mol／LKH2PO缓冲溶液(pH2．5)作流动相，10min内可完成CMP、UMP、AMP、GMP含

2、量的同时测定，最小检测限分别为0．2mg／L、0．2mg／L、0．1mg／L和0．3mg／L，平均回收率分别为99．21％、100．39％、100．07％和99．88％，相对标准偏差(RSD)分别为2．27％、2．83％、2．05％和1．85％。关键词：啤酒酵母；5'-核苷酸；高效液相色谱；分析中图分类号：0657．72；TS261．7；TQ464．6；Q52文献标识码：B文章编号：1001—9286(2008)03—0097—03DeterminationofBeerYeastRNADegradationProduct5-Nu

3、cleotidesbyHPLCTIANBao．yongandZHAOXing-jie(HebeiResearchCentreofAnalysisandTesting，HebeiUniversityofScienceandTechnology，Shijiazhuang，Hebei050018，China)Abstract：Theoptimumdeterminationconditionsoffourkindsof5’一nucleotides(beeryeastRNAdegradationproduct)byHPLCsimultan

4、eouslywerestudied．ThemeasurementofCMP，UMP，AMPandGMPcontentcouldbefinishedwithin10minasODS2columnwasusedascolumn，0．08mol／LKH2PO4(pH=2．5)wasusedasthemobilephaSe，andthedetectionwave-lengthwassetat260hil1．Theresultsshowedthatthemini·mumdetectionlimitwere0．2mg／L，0．2mg，L，0

5、．1mg，Land0．3mg，Lrespectivelyandtheaveragerecoverywere99．21％，100．39％，100．07％and99．88％respectivelyandRSDwere2．27％，2．83％，2．05％and1．85％respectively．Keywords：beeryeast；5'-Nucleotides；HPLC；determination啤酒工业副产物——啤酒废酵母(约占啤酒产量干silODS2—5Ixm色谱柱；紫外分光光度计UV一260(日本重0．15％1中，RNA含量高达6

6、％～8％【~2】，是生产核苷shimadzu)；超声波清洗机(科导超声仪器有限公司)；酸产品的绝好原料。核苷酸是RNA降解的主要产物，在PHS一3酸度计(上海雷磁)；FZQ—Z型旋涡混合器(苏泰医药、食品、化妆品及农业等行业都有重要的用途【3-4]。县医疗器械厂)。因此．近年来，综合利用废弃啤酒酵母提取核苷酸的研标准品AMP、CMP、GMP、UMP，Sigma化学公司；究越来越多。5l_核苷酸混合样品．自制，从废啤酒酵母中提取、降解、目前．国内外测定核苷酸的方法主要有离子交换液纯化制得：磷酸二氢钾、磷酸、磷酸氢二氨、甲醇、乙腈、

7、相色谱法和反相液相色谱法【5】。离子交换色谱法具有较冰醋酸试剂均为分析纯；所用水为二次去离子水。高的分离效率．但需要对分离柱进行平衡、再生，分析时1．2实验方法间较长：反相液相色谱法具有快速、操作方便的优点，但1．2．1标准储备液的制备准确称取5’一核苷酸标准品0．01g(精确至以梯度洗脱方法居多。笔者采用反相高效液相色谱等度0．0001g)，以水溶解后定容至5mL，经0．45Ixm微孑L滤洗脱的方法．快速、准确地分离、检测出降解啤酒废酵母膜过滤，作为标准储备液，浓度为2000mgm。RNA所得胞嘧啶核苷酸(CMP)、脲嘧啶核苷

8、酸(UMP)、1．2．2样品预处理腺嘌呤核苷酸(AMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)。取已经过柱去除杂质的自制5’一核苷酸混合样品l材料与方法粉末溶解于水中．经0．45Ixm微孔滤膜过滤，超声脱气10min．即可直接进样。1．1仪器与试剂1．2．3色谱条件高效液相色