丁二酰亚胺检测方法

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1、·686·药学研究·JournalofPharmaceuticalＲesearch2014Vol．33，No．12HPLC法测定PEG－EPO中丁二酰亚胺的残留量1，21，21，21，2庞甲佩，逄建勇，胥国立，解福生(1．山东阿华生物药业有限公司，山东东阿252201;2．山东东阿阿胶股份有限公司，山东东阿252201)摘要:目的建立聚乙二醇重组人促红素(PEG－EPO)中丁二酰亚胺残留量测定的高效液相色谱法。方法－1使用高效液相色谱法，色谱柱为ShiseidoCapcellPAKC18AQ(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为0.02mol·L－1KH2PO4(pH6.5)，检测

2、波长为210nm，流速为0.7mL·min。结果线性范围为0.08～0.8μg(r=1)，6次重复进样峰面积响应值的ＲSD为0.61%，平均加样回收率为100.96%。结论建立的高效液相色谱法简单、精密度良好、准确度良好，可用于PEG－EPO中丁二酰亚胺残留量检测。关键词:聚乙二醇重组人促红素;丁二酰亚胺;高效液相色谱中图分类号:Ｒ927.1文献标识码:A文章编号:2095－5375(2014)12－0686－003DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2014.12.002DeterminationofsuccinimideresidualinPEG－EPObyHPLC1，2

3、1，21，21，2PANGJia-pei，PANGJian-yong，XUGuo-li，XIEFu-sheng(1．ShandongE－HuaBiopharmaceuticalCo.，Ltd.，Donge252201，China;2．ShandongDong－EE－JiaoCo.，Ltd.，Donge252201，China)Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofresidualsuccinimideinPEG－EPObyHPLC.MethodsHPLCmethodwasusedandtheseparationw

4、asperformedonacolumnpackedwithShiseidoCapcell－1PAKC18AQ(4.6mm×250mm，5μm).Themobilephasewas0.02mol·LKH2PO4(pH6.5).Thedetectivewave-－1lengthwassetat210nm.Theflowratewas0.7mL·min.ＲesultsThelinearrangewasgoodin0.08～0.8μg(r=1)．TheＲSDofpeakareaofsixrepeatedsamplingwas0.61%.Theaveragerecoverywas100.96%.

5、ConclusionThees-tablishedmethodwassimple，highsensitiveandaccuratewithahighreproducibilityandcanbeusedforthedeterminationofresidualsuccinimideinPEG－EPO.Keywords:Pegylatedrecombinanthumanerythropoietin(PEG－EPO);Succinimide;HPLC人促红细胞生成素(Erythropoietin，EPO)是一减缓重组人促红素在体内降解速度，延长重组人促种激素类糖蛋白，相对分子量为30kD，它

6、的功能是红素的半衰期，减少注射次数至每两周1次，减轻病促进红系祖细胞增殖，使之分化为成熟的红细人痛苦，并保证了药效。［1］胞。重组人促红素(rhEPO)是通过基因工程技术在适当的反应条件下，mPEG－SBA和EPO的生产EPO，使之成本更低廉，质量更稳定。临床上N末端α－氨基或赖氨酸ε－氨基反应生成mPEG重组人促红素主要应用于治疗肾功能不全所致贫－EPO及丁二酰亚胺。反应式如下:［2］［3］血和外科围术期的红细胞动员等，治疗效果非常明显。重组人促红素在人体内循环半衰期较短，临床每周注射3次。用甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丁酸酯(mPEG－SBA)对重组人促红素进行修饰，两者通过稳定的共价键

7、结合形成聚乙二醇重组人促红素［4］(PEG－EPO)。PEG－EPO在生物体内无毒性，基金项目:国家重大新药创制专项(No.2012ZX09202－031－004)作者简介:庞甲佩，男，研究方向:生物制药，E－mail:pangjiapei@163.com药学研究·JournalofPharmaceuticalＲesearch2014Vol．33，No．12·687·丁二酰亚胺有一定毒性，为反应副产物，为了更2)，说明mPEG－SB