2015年版《中国药典》三部通则1143细菌内毒素检查法

《2015年版《中国药典》三部通则1143细菌内毒素检查法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、1143细菌内毒素检查法本法系利用蛍试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品屮细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测左法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度试验结果为准.本试验操作过程应防止内毒素的污染。细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁蛍试剂灵敏度

2、、标定细菌内毒素工作标准品的效价，干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中蛍试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线町靠性试验。细菌内毒素工作标進品系以细菌内毒素国家标准品为基進标定其效价，用于干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中蛍试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用。试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内

3、毒素。耐热器皿常用干热灭菌法（250°C、30分钟以上）去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器具，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。供试品溶液的制备某些供试品蛊进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。必要时，可调节被测溶液（或其稀释液）的凶值，一般供试品溶液和蛍试剂混合后溶液的pH值在6.0〜8.0的范围内为宜，可使用适宜的酸、碱溶液或缓冲液调节pH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器屮配制。缓冲液必须经过验

4、证不含内毒素和干扰因子。内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg*h）表示，注射剂K二5EU/（kg*h）,放射性药品注射剂K二2.5EU/（kg*h）,鞘内用注射剂K二0.2EU/（kg*h）:M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/(kg*h)>mg/(kg*h)或U/(kg*h)表示，人均体重按60kg计

5、算，人体表而积按1.62m2计算。注射时I'可若不足1小时，按1小时计算。供试品每平方米体表面积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量5)o按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调整，但需说明理由。确定最大有效稀释倍数(MVD)最大有效稀释倍数数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数(1-MVD),在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。用以下公式來确定MVD：MVD=cL/X式屮L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试品溶液的浓度，当L以EU/mg或EU/U

6、表示时，c的单位需为mg/ml或U/ml，当L以EU/ml表示时，则c等于1.0ml/ml。如需计算在MVD吋的供试品浓度，即最小有效稀释浓度，可使用公式c=X/L；X为在凝胶法小崔试剂的标示灵敏度(EU/ml),或是在光度测定法小所使用的标准曲线上戢低的内毒素浓度。方法1凝胶法凝胶法系通过蛍试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。蛍试剂灵敏度复核试验在本检查法规左的条件下，使蛍试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为蛍试剂的标示灵敏度，用EU/m1表示。当使用新批号的蛍试剂或试验条件

7、发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行蛍试剂灵敏度复核试验。根据蛍试剂灵敏度的标示值(入)，将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟,然后制成2入、入、0.5入和0.25入四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒。取分装有0.hnl蛍试剂溶液的10mmX75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲨试剂原安甑18支，其中16管分别加入0.51不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素

8、检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37°C±1°C的恒温器中，保温60分钟±2分钟。将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180。，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应避免受到振动，造成假阴性结果。当最大浓度2入管均为阳性，最低浓度0.25入管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。按下式计算