基因工程简介

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1、基因工程简介一基因工程的基本内容主要内容1）基因工程的概念2）基因操作的工具3）基因操作的基本步骤基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达实质基因重组（一）基因工程的概念基因工程步骤中需要哪些工具？（二）基因操作的工具步骤一的工具：步骤二的工具：步骤三的工具：基因的剪刀——限制性内切酶基因的针线——DNA连接酶基因的运载工具——运载体基因的剪刀——限制性内切酶（二）基因操作的工具限制酶DNA的

2、一段序列EcoRI识别序列ECORI切割位点作为运载体必须具备哪些条件？（二）基因操作的工具1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3）具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。基因的运载工具——运载体：大肠杆菌的质粒：（二）基因操作的工具基因的运载工具——运载体：基因的针线——DNA连接酶（二）基因操作的工具DNA连接酶连接形成磷酸二酯键用相同的限制性内切酶切割目的基因四个基本步骤：1）提取目的基因2）目的基因与运载体

3、结合3）将目的基因导入受体细胞4）目的基因的检测和表达（三）基因操作的基本步骤目的基因的提取方法（三）基因操作的基本步骤直接分离基因人工合成基因反转录法根据已知的氨基酸序列合成DNA：鸟枪法用限制酶切断成许多片段⑴直接分离基因——鸟枪法将供体细胞中的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到不同的受体细胞中去，让这些DNA片段在受体细胞中扩增。从中找出含有目的基因细胞，并将含有目的基因的DNA片段分离出来。　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大。一般不适用于真核细胞的基

4、因。⑵人工合成基因法DNA合成仪②直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。①反转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连拉酶的作用下连接形成重组DNA分子。目的基因与运载体结合（三）基因操作的基本步骤常用的受体细胞：步骤三：目的基因

5、导入受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。主要借鉴细菌或病毒侵然细胞的途径导入方式：1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。步骤三：目的基因导入受体细胞（三）基因操作的基本步骤受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？步骤四：目的基因的检测和表达