基因工程简介复习

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1、基因工程简介（复习）江苏省羊尖高级中学李斌q基因工程的概念是什么？q基因操作的工具酶有几种？分别是什么？q基因的剪刀是什么？其主要作用是什么？q基因的针线是什么？其主要作用是什么？q基因的运输工具是什么？q运载体必须具备的条件是什么？最常用的运载体是什么？q质粒的结构是什么？q基因操作的基本步骤？例：金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病。降低观赏价值。科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的新品种。根据图回答：培养选择获得抗病基因的茶花细胞带有抗病基因的某植物细胞一、基因操作的工具•⑴基因的剪刀——限制性内切酶（限制酶）•⑵基因的针线——DN

2、A连接酶•⑶基因的运输工具——质运载粒体一、基因操作的工具⑴基因剪刀——限制性内切酶（限制酶）①分布：主要在微生物中。专一性一种限制酶只能识别一种②作用特点：特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子多样性限制酶有200多种③结果：产生黏性末端•④举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。⑵基因的针线——DNA连接酶①连接的部位：②结果：黏性未端的连接起来。⑶基因的运输工具——运载体①作用：将外源基因送入受体细胞②具备的条件：能在宿主细胞内复制并稳定地保存具有多个限制酶切点具有某些标记基因，便于进行筛选

3、③种类：质粒、噬菌体和动植物病毒④质粒的特点：质粒是基因工程中最常用的运载体最常用的质粒是大肠杆菌的质粒分布：存在于许多细菌及酵母菌等生物中化学本质：细胞染色体外能自主主复制的小型环状DNA分子质粒的复制能在宿主细胞外完成吗？质粒的存在对宿主细胞有无影响？思考题：要想将某个特定基因与质粒相连，需要用几种限制性内切酶？3.基因操作的基本步骤1)提取目的基因2)目的基因与运载体结合3)将目的基因导入受体细胞4)目的基因的检测和表达3.基因操作的基本步骤：如何操作？有何缺点？（1）提取目的基因直接分离基因：“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。方反转录

4、法法人工合成基因：据已知的氨基酸序列合成（2）目的基因与运载体结合如何操作？操作方法？用了哪些工具酶？（3）将目的基因导入受体细胞借鉴方法？细胞壁用何种物质处理？作用？受体细胞有那些？（4）目的基因的检测和表达如何检测？直接分离基因——鸟枪法用限制酶将通体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让外源DNA在受体用限制细胞中复制而扩增，找到含酶切断成有目的基因的细胞，分离出许多片段含有目的基因的DNA片段缺点：带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。人工合成基因反转录目的基因的mRNA反转录

5、合成法单链DNA双链DNA人蛋白质的氨基推测mRNA结构基因的合成目的工推测核苷酸序列基因合酸序列成基因（2）目的基因与运载体结合用同一种限制酶去切割质粒和目的基因，加入DNA连接酶，形成重组DNA分子（重组质粒）（3）将目的基因导入受体细胞借鉴噬菌体侵染细菌的方法来进行。为使重组的DNA分子更容易进入受体细胞，通常要用CaCl2对受体细菌进行处理，使受体细菌具有更大的通透性。（4）目的基因的检测和表达全部受体细胞中，摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。要进行检测目的基因是否导入成功，如何检测？ABCD表达：受体细胞表现出特定的性状。重组

6、的DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程基因工程概念——定向改造生物的新技术别名基因拼接技术DNA重组技术操作环境生物外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切→拼接→导入→表达结果人类所需要的产品原理：基因重组基因工程在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的产品。