(精选)木霉菌生态学特性研究

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1、2001杨合同,徐砚珂,王加宁,唐文华。木霉菌类生物防治菌的生态学特性。山东植物病理研究。中国农业岀版社,北京,Ppi32-138木霉菌类生物防治菌的生态学特性杨合同,徐砚珂,王加宁(山东省科学院生物研究所,济南,250014)唐文华(中国农业大学植物病理系,北京,10()094)摘要:在多种植物根际能分离到对棉花枯萎病菌有拮抗作用的木霉菌。本文分离并鉴定的拈抗性木毒菌有绿色木霉菌(Trichodermaviride),哈茨木每菌(Trichodermaharzuinum)和康宁木霉菌(Trichodermakoningii)。木霉菌的菌落伸

2、展速度在菌株间差别不明显。木孫菌菌株的产孑包能力比较强,多数菌株在每克培养基屮的分生砲子产最均在21X10*个/克干重以上。木霉菌可以耐受土壤的抑菌作用,加入土壤7犬后的回收率均在13.1%以上;木霉菌接种棉花种了后可以进入棉花植株内部,冇的可以到达茎的中部。木霉菌显示出明显的根际效应,不同菌株在棉花根际的定殖能力有很人差异。前吞良好的适应性,多机制性和广谱性是木霉菌在生物防治研究工作中受到广泛关注的重要原因。优秀木霉菌类生物防治菌的分离与筛选与样木的来源有很人关系,普遍认为牛防菌株应当尽可能來白病害衰退III,或者寄主植物的周围坏境,如根表

3、,根际及具牛长所在的土壤(Bakeretal,1974;Cooketal,1983)。木霉菌分布广泛,能够从很多环境如十壤,污水,植物组织等分离得到,但是木霉菌类生防菌株对于植物是否有选择性,则少有研究。木文采集了多种样殆进行木霉菌的分离,以棉花为宿主植物,以棉花立枯病菌、枯萎病菌和黄萎病菌为指示菌株,筛选了木霉菌类生物防治菌,研究了他们的住态学特性,希望为木霉菌的宿主专化性提供证据。材料与方法1生防菌株的分离与筛选1.1样品的处理采集并供分离的植物样品12科近20种的植物,分别是禾本科:小麦、早熟禾;豆科:蚕豆;菊科:泥胡菜;十字花科:播娘

4、蒿;锦葵科:木槿,棉花;百合科:葱、蒜;堇菜科:紫花地丁;蔷薇科:玫瑰、西府海棠;栋科:香椿;忍冬科:锦带花;伞形科:芹菜;人戟科:菠菜,等等。其它样吊包括各种食用菌的患病了实体,主要包括木耳、灵芝和各种磨菇。分离时,取植物根际土壤(在实验室内将根系土壤稍风干,轻扌n根系,使粘附土壤脱落,然后以灭菌水充分漂洗根上残留的土壤,漂洗液即为根际土样。1.2分离方法木霉菌的分离用PDA培养基(含氯霉索100ppm)o将样品稀释102-105倍,取0.1ml于培养基平板,用灭菌的L形玻璃棒涂匀,置于28°C恒温箱中培养,真菌产砲Z前纯化,保存于PDA斜

5、面上。TSM培养基(MgSCU・7H?O0.2g,K2HPO40.9g,KC10.15g,NH4NO3l.Og,葡萄糖3.0g,氯霉素0.25g,玫厩红0.15g,敌克松60%nJ'湿性粉剂0.3g,PCNB0.2g,琼脂2()g)也用于木霉菌的分离(唐文华等,1992)。1.3筛选木霉菌生防菌株的指示性状(1)平板上对冃标病原菌的拮抗作用,以抑菌圈的有或无来判断。(2)平板上对目标病原菌的垂复寄住能力。以上测定所川的指示菌株为:棉花立枯病^(Rhizoctoniasolani)Rhs-1,本研究室分离保存;棉花枯萎病菌(Fusariumox

6、ysporumf.sp.vasinferturn)AG-158;棉花黄萎病菌(Verticilliumdahliae)V-19,由中国农业科学院植保所棉病研究室提供。1.4木霉菌的鉴定在显微镜下观察菌丝,分牛砲子及厚垣砲子的形态,按Bissett(1984,1991a,1991b,1991c),Rifai(1969)和文成敬等(1993)的方法鉴定。2生态学特性测定2.1描抗作用测定对于细菌和放线菌,采用双层平板法进行。在平板上点种分离物,在NA培养基上于28°C培养拮抗菌至合适时间,再用氯仿将培养好的菌落熏蒸30分钟杀死,然后将混有病原菌繁

7、殖体的PDA培养基倾于平板上,于28°C继续培养,观察拮抗圈的冇无及大小。木霉菌则在PDA培养基上培养24小时后宜接接种于混有病原菌繁殖体的PDA平板上,于28°C继续培养,2-3天后观察抑菌圈的人小。2.2重复寄生能力测定在PDA平板上对峙培养挑战病原菌和待测拮抗菌,当两菌落接触后,将平板直接置于显微镜下观察拈抗体对病原菌的寄生现象,包括单位病原菌菌丝上拈抗菌的寄生点,菌丝的寄生方式,在两个菌落交叉处于显微镜下计数病原菌菌丝被木每菌寄生的百分数,表示寄生能丿J的强弱。2.3木霉菌生长速度测定制备PDA平板,玉米琼脂(玉米粉3g,琼脂1.6g

8、,水100ml)平板和NA平板,取在PDA平板上活化3次的直径为0.6cm的琼脂块接种于三种平板小央,2LC培养,菌落覆盖整个平板时测量菌落的直径,计算菌落每天的扩

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