大白杜鹃组织培养研究

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1、人白杜鹃{RhododendrondecorumFranch.）是杜鹃花科（Ericaceae）杜鹃花属{RhododendronL.）常绿木木植物，是我国特有种，主要分布在四川、云南、贵州、西藏、湖北、湖南等地，生于海拔1000〜3200m的林下、灌丛中⑴。犬白杜鹃是一种多用途植物，其不仅可供观赏，还可药用和食用。大白杜鹃花大，花冠漏斗状钟形，白色或带蔷薇色，花梗貝-绿色或粉红色斑点，花开之时，有阵阵清香扑面而來，沁人心脾；其性味“苦，凉，有小毒”，具有调和经血、润肺清喉、益气宁神等功效；此外，其花瓣富含多种氨基酸和维生素，味道精美、营养

2、丰富⑵。1=1前，人口杜鹃的利用主要以采集野生资源为主，人为的乱采滥挖，使其牛•境遭到严重破坏，资源F1益受到威胁，现有的种子繁殖和抒插繁殖技术因受资源和季节的限制，很难大规模育苗。为了更好的保护、利用、开发大白杜鹃资源，研究大白杜鹃组培快繁技术具有重要意义。近儿年，虽有大白杜鹃组织培养方血的零星报道⑶⑷，但存在繁殖系数低，继代、牛•根闲难等问题。以种子胚为外植体的大白杜组培研究尚未见报道。种子作为组培材料较茎段、茎尖有取材方便，不伤害母株等优点，适合大规模育苗。笔者以大白杜鹃成熟种子为外植体，対大白杜鹃进行了组织培养研究，以期建立大白杜鹃

3、组培快繁体系，为大规模开发应用大白杜鹃资源提供技术支持。1材料与方法1.1材料供试材料为多年牛大白杜鹃（RhododeM伽decoMnFranch.）的成熟萌果，材料采自百里杜鹃自然保护区。1.2方法1.2.1外植体的获取与灭菌取人白杜鹃尚未开裂的萌果，在流水卜•用牙刷刷洗朔果表面,在超净工作台上用75%乙醇消毒30s,0.1%升汞溶液消毒lOmin,无菌水冲洗1次，再用10%过氧化氢溶液浸泡3〜5min,无菌水冲洗5〜6次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，剥开朔果，将种了抖撒在种了萌发培养基上。1.2.2试验设计以大白杜鹃当年生种了为外植体，

4、以1/4MS培养基为基本培养基，附加不同浓度ZT（玉米素）、TDZ（苯噬隆）、2Tp（2-戊乙烯棊腺卩票吟）、GA（赤霉素）、NAA（奈乙酸）、TBA（眄W朵丁酸）等多种植物激素，力求找出适合大白杜鹃种了培养各个阶段的培养基配方。1）种子萌发试验。激索种类及川量详见表1;2）愈伤组织诱导与从牛芽继代试验。激索浓度及配比详见表2；3）从主芽伸长壮苗试验。激素浓度及配比详见表3；4）纽培苗牛根试验。激索浓度及配比详见表4。所配培养基除牛•根培养基的蔗糖为25mg/L外，其他培养基均加入30mg/L蔗糖和10g/L琼脂,pH5.4〜5.8。1.3

5、培养条件培养温度（25±1）°C，光照时间12h/d,光照强度40〜60mnol/（m2・s）。Bi0.50.1表1无菌种子萌发试验Tabic1Testofdifferenthonnonconseedgermination培养基编号No.激索组介/(mg/L)HormonecombinationA,TDZ().5+NAA0.01A2ZT0.5+NAA0.01A32-ip0.5+NAA0.01A41/4MS空白培养基表2愈伤组织诱导及丛生芽继代试验Table2Testofdifferenthormoneoninducingcallusandm

6、ultiplicationofshootclumps培养基编号激素组合/(mg/L)HormonecombinnlionNo・ZTNAA金伤组织诱导试验b20.50.5b3().51.()b40.80」B$0.80.5b60.81.0b71.20.1Bs1.20.5b91.21.0B.o1.5()」Bn1.50.5Bl21.51.0Bb2.0().1B]42.0().5Bis2.01.0丛生芽继代试验Cl1.50」C21.50.5C31.51.0C42.0()」C52.00.5Q2.01.0表3丛生芽伸长壮苗试验Table3Testofdi

7、fferenthormoneongrowthandsoundseedIingofshootclumps培养基编号No.激索组合/(mg/L)HormonecombinationTDZGADi0.11.0D20.51.061.01.0Dj0」2.0d50.52.0d61.02.0表4组培苗的生根试验Table4Testofdiflerenthormoneoninducingroots培养基编号No.激索组令7(mg/L)活性洪尺Activecarbon(AC)NAAIBAEt1.000.08e21.01.00.08e32.000.08E42.

8、01.00.08e53.01.00.082结果与分析2.1初代培养2.1.1激素对无菌种子萌发的影响从表5可知，在1/4MS培养基屮加入植物激索和不加植物激素均能诱导无菌种子萌发