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1、替格瑞洛原料中甲酸含量的检查［摘要］0的运用高效液相色谱法测定替格瑞洛原料药中甲酸的含量。方法采用WelchUltimateAQ-Cls色谱柱(4.6mmX250mm,5um)；以pH=2.5磷酸缓冲液及乙購为流动相,进行梯度洗脱;流速1.OmL/min；检测波长210nm；柱温30°Co结果甲酸在10.06〜70.39ug/mL浓度范围内，浓度和峰面积线性关系良好，线性方程：Y=2.88X10X(过原点)，r=0.9957；回收率平均值为98.7%,RSD为0.73%。结论该方法可行，对替格瑞洛原料的质量控制有一定的意义。［关键词］高效液相色谱法；梯度洗脱；替格瑞洛；甲
2、酸替格瑞洛是首个可逆的结合型P2Y12腺背二磷酸受体(ADP)拮抗剂,能可逆性地作用于血管平滑肌细胞上的卩票吟2受体亚型P2Y12,对ADP引起的血小板聚集冇明显的抑制作用，能冇效改善急性冠心病患者的症状，己被证明比Plavix更有效，是第一个证实能减少急性冠脉综合征所有类型的心血管死亡的抗血小板药物。我司的替格瑞洛合成工艺中使用了甲酸溶剂。甲酸为第三类溶剂，根据药典要求，需限制使用，中国药典规定其限度为0.5%。为保证我司替格瑞洛的产品质量，建立了液相分析方法对残留的甲酸含量进行检测，并对该方法进行了方法学验证，确保检测结果的准确可靠。1仪器与试药DionexUltiM
3、ate3000高效液相色谱仪；Chromeleon7工作站；德国赛多利斯BP211D型电子天平。替格瑞洛样品（珠海保税区丽珠合成制药有限公司，批号为140300K1403002、1404001）；甲酸对照品（色谱纯，Fisher）；注射用水；磷酸二氢钠（分析纯，广州化学试剂二厂）；磷酸（分析纯，广州化学试剂厂）。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为WelchUltimateAQ-C18柱（4.6mmX250mm,5um）；柱温为30°C；流动相A为磷酸缓冲液（50mniol/L的磷酸二氢钠，磷酸调pH值至2.5）；流动相B为乙月青；流速为1.0mL/min；检测波长为210
4、mm；进样量为5uL,按表1采用梯度方式进行洗脱。2.2溶液制备取甲酸适量，精密称定，加20%乙月青溶解并定量稀释成每1讥约含50吒甲酸的溶液，加20%乙睛定容至刻度,即得对照品溶液（约50ug/mL）o取本品250mg,精密称定，置量瓶中，加乙M5mL,50°C水浴使完全溶解,放冷，加水定容至刻度，摇匀，离心，上清液过滤，即得供试品溶液。2.3方法学考察2.3.1色谱柱及检测波长的选择甲酸属人极性的小分子有机物，在常规的C18色谱柱上较难保留，研究过程中尝试了常规C18色谱柱、HILIC亲水色谱柱和AQ-C18o色谱柱，结果显示，AQ-C18色谱柱对于甲酸有较好的保留且
5、峰形良好，故采用AQ-C18色谱柱进行研究。参考相关文献资料，采用210nm的波长进行考察。2.3.2线性关系的考察取甲酸对照品适量，精密称定，加20%乙膳溶解并定量稀释成每lmL约含0.lmg的溶液，作为对照品储备液。分别精密量取1、2、3、4、5、6、7mL,lOmL量瓶中，加120%乙腊定容至刻度,作为不同浓度的线性供试液（约相当于甲酸限度浓度的20%〜140%）。分别精密量取5pL,按“1.2.1项”色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图,以峰面积为纵坐标，以溶液浓度（Ug/niL）为横坐标，进行线性回归（过原点），回归方程为Y=2.88X10-4x,r=0.995
6、7,结果表明，甲酸在10.06〜70.39ug/mL浓度范围内,浓度与峰面积的线性良好。2.3.3精密度试验系统精密度。精密量取甲酸对照品溶液5uL,重复进样6次，甲酸峰面积RSD为1.13%o重复性试验。平行制备6份替格瑞洛供试品溶液，分别精密量取供试甜溶液和甲酸对照品溶液各5pL,注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各样品中的甲酸含量，检验结果显示，6份供试品溶液均未检出甲酸。2.3.4溶液稳定性试验将样品与甲酸混合，在室温条件下放置，于0、2、4、6、8h取样，以甲酸峰面积计算，RSD值为1.12%,表明样品溶液在室温条件下8h内稳定。2.3.5准确度试
7、验取甲酸对照品适量，精密称定，加乙月青溶解制成含甲酸为2.5mg/mL的溶液，作为对照品储备液；分别取对照品储备液4、5、6mL,置50mL量瓶中，加乙睛稀释至刻度，制成甲酸浓度分别为0.20、0.25和0.30mg/mL的乙月青溶液，作为标准加入液。另取甲酸对照品适量，精密称定，用20%乙月青制成甲酸浓度约为50Pg/mL的溶液，作为对照品溶液。取替格瑞洛样品0.25g,置25mL量瓶中，平行9份，分为三组，分别加入三个浓度的标准加入液5mL,50°C超声使完全溶解，放冷，加水定容至刻度，摇匀，离心，上清液0.45um滤过，
