大肠杆菌的微生物学检查

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1、从饮水中分离大肠杆菌①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿屮，凝成平板，待用。②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。④将划线后的培养皿倒置37°C温箱中培养18〜24小时。培养基中会岀现大肠杆菌菌落,菌落屮心呈暗蓝黑色，发金属光泽。⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。大肠杆菌的微生物学检查细菌的分离鉴定肠道外感染取屮段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。粪便标木直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。其他标木可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37°

2、C孵育18〜24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。采用—•系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒索。泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量3100,000时，才冇诊断价值。卫生细菌学检查人肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周F同环境和水源、食品等。取样检查时，样品中人肠杆菌越多，衣示样品被粪便污染越严重，也衣明样品中存在肠道致病菌的对能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫牛细菌学检查。细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，釆用倾注培养计算。我国规定的卫牛标准是每毫升饮水屮细菌总数不得超过100个。人肠菌数指数：指每立升屮大肠菌群数，采

3、用乳糖发酵法检测。我国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。实验二大肠菌群（M・R・N・）检验1目的了解人肠菌群在食品卫生检验屮的意义学习并掌握大肠菌群的检验方法2原理人肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（themostprobablenumber-简称M

4、PN）表示。3材料3.1样品孚L、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品或其他食品。3.2菌和

5、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)产气肠杆菌(Enterobacteriaaerogenes)3.3培养基及试剂单料乳糖胆盐发酵管、双料乳糖胆盐发酵管、乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂(EMB)、革兰氏染色液。3.4其它恒温箱、恒温水浴、药物天平、培养皿、载玻片等4流程5步骤取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成1:10的均匀稀释液为检样。同一稀释度在做菌落总数的测定的同时接种乳糖胆•盐发酵管，并且用大肠埃希氏菌、产气肠杆菌混合菌种作对照。5.1乳糖发酵试验根据食品卫生要求或对检

6、样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。置36±1°C温箱内，培养24±2小时，如所冇发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者，则与对照的混介菌种一起按下列程序进行。5.2分离培养将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂(EMB琼脂)平板上划线分离。然后置36±1°C温箱内，培养18-24小时后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。5.3证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌落1〜2个

7、进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1°C温箱培养24±2小时,观察产气情况，凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽砲杆菌，即可报告为大肠菌群阳性.5.4报告根据证实为人肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml(g)人肠菌群的MPN值。6结果6.1试验结果表接种量管号发酵反应结果有无典型菌落革兰氏染色结杲复发酵反应结果最后结论+或-1ml1230」ml123().0lml1235.2结果报告根据证实人肠菌群的阳性管数，查MPN检索表(见附录)报告每100ml(克)人肠菌祥的最可能数.7思考1人肠菌群检验屮为什麽首先要川乳糖胆盐发酵管？2作空白对照实验的口的？3为什么人肠菌

8、群的检验要经过复发酵才能证实？4复发酵时为什么使用乳糖发酵管但不盂加胆盐？