蛋白沉淀反应

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1、实验2蛋白质的等电点测定和沉淀反应ʺ实验目的⃔了解蛋白质的两性解离性质⃔学习测定蛋白质等电点的一种方法⃔加深对蛋白质溶液稳定因素的认识⃔了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义₪蛋白结构改变可导致其溶解度发生改变◆在pH>pI时，蛋白带负电，蛋白分子相互排斥,蛋白呈溶解状◆在pH

2、重金属作用:如硝酸银⃑蛋白和某些有机酸作用:如三氯乙酸ʺ试剂和器材₪试剂&新鲜鸡蛋&0.4%酪蛋白醋酸钠溶液取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40-50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。加入10mL1mol/L醋酸钠溶液。把锥形瓶放到50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移到100mL容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。&1.00mol/L、0.10mol/L、0.01mol/L醋酸溶液&蛋白质溶液5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1:9）&pH4.7醋酸—醋酸钠的

3、缓冲溶液100mL3%硝酸银溶液10mL5%三氯乙酸溶液50mL95%乙醇250mL饱和硫酸铵溶液250mL硫酸铵结晶粉末0.1mol/L盐酸溶液300mL0.1mol/L氢氧化钠溶液300mL0.05mol/L碳酸钠溶液300mL甲基红溶液20mL₪器材水浴锅温度计200mL锥形瓶100mL容量瓶吸管试管及试管架乳钵ʺ实验操作₪酪蛋白等电点的测定&取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。试管号蒸馏水0.01mol/L醋酸0.1mol/L醋酸1.0mol/L醋酸pH混浊程度(mL)(mL)(mL)(mL)18.40.6——5.928.7—0.3—5.538.0—1.0

4、—4.747.4——1.63.5&4支试管中各加4%酪蛋白醋酸钠溶液1mL并马上摇匀。观察其混浊程度。静置10min后，再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。₪蛋白质的沉淀及变性▐蛋白质的可逆沉淀盐析:无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）能析出蛋白质。Ø加蛋白质溶液5mL于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数min,观察是否有沉淀,为什么？(沉淀为球蛋白)。Ø倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？Ø将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。观察是否有沉淀,为什么？(沉淀为清蛋白)。▐蛋白质的不可逆沉淀&重金属离子沉淀蛋白质重金属离子与蛋白质结合成

5、不溶于水的复合物。Ø取1支试管，加入4%酪蛋白醋酸溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察是否有沉淀,为什么？Ø如有沉淀产生。倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？&某些有机酸沉淀蛋白质Ø取1支试管，加入4%酪蛋白醋酸溶液2mL，和1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察是否有沉淀,为什么？Ø如有沉淀产生。倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？&有机溶剂沉淀蛋白质Ø取1支试管，加入4%酪蛋白醋酸溶液2mL，再加入2mL95%乙醇。观察沉淀的生成（如果沉淀不明显，加点NaCl，混匀)。Ø如有沉淀产生。倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解

6、？为什么？&乙醇沉淀蛋白质Ø取3支试管，取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂,摇匀并观察是否有沉淀生成：试管号蛋白溶液0.1mol/LNaOH0.1mol/LHCl95%乙醇pH4.7(mL)(mL)(mL)(mL)缓冲液(mL)11——11211—1—31—11—Ø以上3支试管再分别加入以下试剂,观察颜色和沉淀现象试管号水甲基红0.1mol/L醋酸0.05mol/L碳酸钠0.1mol/LHCl(mL)(滴)18————281滴(观察颜色)用醋酸中和pH—数滴381滴(观察颜色)—用碳酸钠中和pH数滴