文蛤不同壳色群体的甲基化分析【开题报告】

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1、毕业论文开题报告生物工程文蛤不同壳色群体的甲基化分析1.课题研究意义及国内外研究现状研究意义：文蛤肉味鲜美，早有“天下第一鲜”的盛誉，且有美容养颜、润脏健脾、增强体力等保健功能和降糖、降血脂、抗突变、抗衰老等药用价值。然而，我国当前文蛤养殖出现了不同程度的性状退化、抗逆性差、单产降低等问题，严重制约了规模化、集约化养殖的快速、稳定、持续发展。分子标记辅助选择具有结果可靠、不受环境影响、可进行早期选择大大缩短选择周期等优点。MSAP是一种改良的AFLP方法，是一种AFLP与DNA甲基化相结合的标记，是甲基化敏感限制酶印迹法和AFLP的集成，它既克服了So

2、uthernBlot杂交技术复杂的缺点，同时又兼有AFLP的优点。应用MSAP技术对文蛤四种壳色的DNA甲基化分析，检测它们的甲基化多态性，分析它们的甲基化模式，了解文蛤的甲基化水平，从而为建立文蛤不同壳色鉴别的分子标记奠定基础。研究现状：MSAP技术由ReynaLopez等于1997年首次报道，该技术是在AFLP技术基础上衍生的基于PCR扩增多态性的DNA甲基化检测方法，即将标准AFLP分析中使用的高频酶MseI替换成对甲基化位点敏感性不同的一对同裂酶HpMI和MspI，而其余操作与AFLP完全一样。MSAP是在AFLP基础上建立的，因此不仅具有AF

3、LP的特点，还能检测DNA甲基化差异，可以作为一种分子标记，进行资源鉴定。洪柳等对24个脐橙品种之间进行MSAP分析，发现在脐橙品种中DNA甲基化的发生频率很高。NoyerJL等应用SSR、AFLP、MSAP等技术对30个香蕉品种的遗传分析研究中，发现应用MSAP分析可以检测出极高的多态性片段。目前发现海洋贝类的种类很多，但目前仅在极少部分海洋贝类中有MSAP标记的报道，而在文蛤这种重要的滩涂贝类中还未见有任何报道。2.课题研究的主要内容、预期目标和研究方案研究内容：①建立MSAP技术体系：确定全基因组DNA适宜的酶切、连接条件；建立稳定、高效的PCR

4、扩增体系和扩增条件；筛选出适合文蛤的PCR选择性引物；建立稳定的琼脂糖和聚丙烯酰胺电泳体系；掌握数据分析软件。②通过群体遗传结构分析，找出文蛤不同壳色品系间的MSAP遗传标记的差异，确定与壳色性状控制基因连锁的遗传标记，以提高选种效率和缩短选择周期。预期目标：MSAP技术体系的建立，研究不同花色品系间的遗传差异，找出与壳色等目的性状紧密连锁的分子标记，为文蛤良种选育提供理论依据；利用MSAP标记分析的结果，在DNA水平上评价文蛤每一代的选种效果，为种质的鉴定提供有力工具。研究方案：①MSAP标记技术体系的快速建立：初步掌握了实验流程和分析体系，建立稳定

5、的MSAP技术体系；②MSAP引物的筛选：查阅文献，参考其他贝类中扩增效果较好的引物，先粗略筛选，以缩短筛选时间和降低成本，然后通过反复试验筛选最佳引物；③文蛤不同壳色花纹品系的MSAP标记分析：采集选育4个壳色品系个体各30枚，活体解剖，用闭壳肌提取DNA，利用MSAP标记技术分析不同壳色品系间的遗传差异，找出与控制生长基因连锁的分子标记，用于选种效果评价和分子标记辅助育种。3.课题进度计划2010.10.01—2010.11.01完成毕业论文选题，接受任务书，初步查找相关资料；2010.11.02—2010.11.15系统收集资料，完成实验计划和方

6、案并申请实验教室、实验用品和相关试剂开始进行实验；2010.11.15—2010.01.20进行实验，记录关键性的实验步骤和实验数据；2011.01.21—2010.02.25数据的整理以及完成论文初稿。4.参考文献[1]张燕，陈波.DNA甲基化敏感扩增多态性技术及其在作物遗传研究中的应用[J].西昌学院学报,2009,23(4):7-10.[2]洪柳，邓秀新.应用MSAP技术对脐橙品种进行DNA甲基化分析[J].中国农业科学2005，38(11)：2301-2307.[3]吴春太，李维国，高新生，张晓飞.MSAP技术及其在橡胶树遗传育种研究中的应用前

7、景[J].贵州农业科学2009，37(11)：9-14.[4]张敏，权力，张霆.DNA甲基化水平定量分析方法研究进展[J].国际遗传学杂志,2010.33（1），28-31.[5]肖正中，邬苏晓,DNA甲基化分析方法[J].生命的化学，2008.28(4)，489-491.