玻璃微珠载体的制备与固定化酶条件的研究

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1、湖南农业大学硕士学位论文玻璃微珠载体的制备与固定化酶条件的研究姓名：王宝康申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：谢达平20071201摘要本研究首先用分椭法和填充法制作了两种多孔玻璃微珠FXBL和TCBL，用它们作为载体分别用物理吸附法、共价偶联法和重氮法固定了a一淀粉酶，猩对它们的固定效果比较后，选取了共价偶联法进行了较详细的研究；确定了共价偶联8-淀粉懿懿最娃霾定象{孛、最往应麓条箨秘霾定像酶匏毪囊；劳磅究了多魏玻璃微珠制作条件对固定化酶的影响和多孔玻璃微珠对过氧化氢酶及谷氨酸脱羧酶的固定化

2、效果，主要结果如下：(1)FXBL和TCBL豹平均粒径分别为1．48n,zn和1，49嘲；FXBL的侵蚀率为33。筋％；FXBL帮TCBL均寿较努豹强度，努黧必32Kg虎彩藕26Kg／Can2；FXBL和TCBL的吸水率分别鼹27．37％和25．32％；体积密度分别烧1．34g／Cm3和1．37g／Cm'；擞气孔率分别怒33．60％和31．87％。<2)用Y一氨焉繁三乙氧基硅烷处理徽珠表露最佳懿越必3h，活化烧鏊胺玻璃徽珠托BL帮FXBL辩戊二醛的最佳浓度分期为3％巍2％(3)基价偶联法阐定a一淀粉酶的最佳固定

3、条件为：温度10℃；pH=6．2：给酶量TCB[。为2．69／L、FXBL为2．49／L；时间12h。(4)荚徐偶联法霾定程一淀粉酶豹最佳应惩条传为：滋发756C，程跣露定亿酶pH缓为5．2、FXBL固定证酶为5．4，分别鞫：自由酶的簸适pH6．0低0．8和0．6个pH单位。(5)固定化d一淀粉酶的性质：在80’C受热lh，固定化酶的活力下降小于7％，瑟爨由酶活力嬲下洚至83％；FXBL固定能瓣_稳诧跣辫迩凭酶分别锼翔5次和8次逐可以保持60％的活力。(6)用TCBL作载体的固定化酶的总活力为357．39U／g

4、，网定化活力回收率为39．79％，活力表现搴为66．73％。用FXBL作载体的固窥化酶的总活力走324。96U／g，鋈定铯溪力嚣毅率为36。18耘活力袭瑷率必54．25％。(7)580℃分相玻璃优于560℃，分相时间剃36h后，分相对固定化酶活力影响不犬；多孔玻璃用0．3mol／L的KOH溶液扩孔3h是最理想；当盐酸的浓度为0．3mol／L时侵蚀成我，固定化a～淀粉酶活力达到最大值。(8)多藐玻璃霜露酶有一定遴强经，主要敬决予箕表嚣麴改往情况，本实验的表面交际为戊二酶，所以能被戊二醛交联的酶，就可用本载体制各固

5、定他酶。关键词：多孔玻璃微珠；a一淀粉酶；固定化酶ABSTRACTTobeginwith，twokindsofporousglassbeads，FXBLandTCBL，werepreparedbyphaseseparationandstuffingsalts．Thebeadswereusedascarrierforimobilizinga—amylasebyaborption，convalentbindinganddiazotization—couplingmethods．Andmeanwhile，thethr

6、eemethodswerecomparedthrougheffectofi咖obilization，sooneofthem，theconvalentbindingmethod，waspickedoutandstudiedindetail，thentheoptimalconditionsoftheimmobilizationandapplicationareobtained．Afterthen，thepropertiesofimmobilizationofⅡ一amylasewerestudied．Secondly

7、，effectofmakingporousglassbeadprocessonimmobilizedQ—amylasewasstudied．Finally．porousglassbeadswereusedascarrierforimmobilizingcatalaseandglutamicaciddecarboxylase．sotheeffectivenessofporousglassbeadsascarrierwasverified．Themainconclusionisf01lowedas：(1)Theme

8、andiameterofFXBLis1．48ramandTCBLis1．49mm．ErosionRatioofFXBLis33．65％．IntermsofFXBLandTCBL．Strengthis32kg／cm2and26kg／cm2’andWaterAbsorptionis27．37％and25．32％，andBulkDensityis1．34g／cm3and1．37g／cm3，a