实验五一培养基的制备与灭菌

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1、（一）培养基的制备与灭菌实验五、土壤中微生物的分离纯化与活菌计数一、培养基的制备目的要求明确培养基的配制原理通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤按培养基的用途分基础培养基鉴别培养基选择培养基按培养基的物理状态分固体培养基半固体培养基液体培养基基本原理按成分不同分天然培养基合成培养基半合成培养基培养基的配方牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（一种天然培养基，用于分离和培养细菌）配方：牛肉膏3g蛋白胨10g氯化钠5g琼脂20g水1000mlpH7-7.2灭菌121℃20min高氏Ⅰ号培养基（一种合成培养基，可用于培养放线菌

2、）配方：可溶性淀粉20gKNO31gNaCl0.5gK2HPO40.5gMgSO40.5gFeSO40.01g琼脂20g水1000mlpH7.2～7.4灭菌121℃20min马丁氏培养基（一种合成培养基，可用于分离培养真菌）配方：蛋白胨　　　　５g葡萄糖10gK2HPO4１gMgSO4·7H2O0.5g琼脂20g１%孟加拉红水溶液3.3ml水1000mlpH自然灭菌121℃30min使用前，添加链霉素固体淀粉培养基（一种鉴别培养基，用于大分子物质水解的生理生化鉴定）配方：蛋白胨10gNaCl5g牛肉膏5g可溶性淀粉2g蒸馏水

3、1000ml琼脂20g灭菌121℃20min葡萄糖蛋白胨水培养基（一种鉴别培养基，用于肠道菌的生理生化鉴定）配方：蛋白胨5g葡萄糖5gK2HPO42g蒸馏水1000mlpH7.0～7.2灭菌112℃30min器材溶液或试剂4mol/LNaOH，1mol/LHCl，各类培养基的配方药品。仪器或其他用具试管，三角瓶，搪瓷杯，量筒，天平，药匙，电磁炉，高压蒸气灭菌锅，pH试纸(pH5.5～9.0)，硅胶塞，棉花，报纸，记号笔等。操作步骤（一）1．计算：根据配方按照用量计算。2.称量：3．溶解：如有琼脂，要不断搅拌避免糊底。4、调节

4、pH：用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节，以pH试纸或pH计测定。5．过滤：趁热用四层纱布过滤。（本次实验省略）操作步骤（二）6.分装试管：固体不超过试管高度的1/5；液体、半固体不超过试管高度的1/4或1/3。三角烧瓶：总体积的一半为限。管口或瓶口不得沾有培养基操作步骤（三）7.加塞1.正确；2.管内部分太短，外部太松；3.外部过小操作步骤（三）8.包扎：注明培养基的名称。9.灭菌：按不同培养基所需的温度、时间灭菌。10.搁置斜面(1/3～l/2，不能超过1/2)。11.无菌检查实验无菌器皿的准备无菌水：在试管

5、或三角瓶内量取实验所需的自来水，经121℃20min灭菌。无菌移液吸管、培养皿：报纸包扎后，经121℃20min灭菌了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。目的要求二、消毒与灭菌灭菌是指杀死一切微生物的营养体，芽孢和孢子。消毒则指消灭病原菌和有害微生物的营养体，因而只是部分灭菌。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。基本原理干热灭菌火焰灼烧法干热灭菌法（烘箱内热空气灭菌法）湿热灭菌法加压蒸汽灭菌法紫外线灭菌法微孔滤膜过滤除菌火焰灼烧法直接在火焰上灼烧灭菌主要用于实验

6、室接种针(环)、试管口、三角瓶口和金属小工具等的灭菌。干热灭菌法设备：电热烘箱适用于耐高温器皿，160-170℃，维持2小时注意事项：温度不可超过180℃，以防玻璃器皿上的棉塞及包装纸烤焦着火。灭菌时物品不宜堆放得太紧，以免妨碍空气流通。灭菌物品不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。电烘箱内温度＜70℃时，方可打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。2.湿热灭菌(一）高压蒸汽灭菌法：是将物品放在高压蒸汽灭菌锅内0.1MPa，121℃保持15～30min进行灭菌，从而导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。时间的长短可

7、根据灭菌物品种类和数量的不同而有所变化，以达到彻底灭菌为准。此法适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。原因一：湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低。卵白蛋白含水量/%30分钟内凝固所需温度/℃50562574~801880~9061450160~170蛋白质含水量与凝固所需温度的关系为什么干热灭菌比湿热灭菌所需的温度高，时间长？原因二：湿热的穿透力比干热大。原因三：湿热的蒸气有潜热存在。温度/℃时间/h透过布层的温度/℃灭

8、菌干热130~1404867270.5不完全湿热105.33101101101完全在同一压力下，含有空气的蒸汽所达到的温度低于饱和蒸汽的温度，所以排气是否完全很重要。间歇灭菌法：应用于不易于高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等。此法是用阿诺氏流动蒸汽灭菌器进行灭菌，每