[精品]微生物实验设计-病原性球菌的鉴定

《[精品]微生物实验设计-病原性球菌的鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、医学微生物学实验设计姓名：姚淑宝学号：2010514349班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河了人学医学院石河了832000）摘要：球菌是细菌中的一吠类，其中对人类有致病性的球菌包括分加葡萄球菌加、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性,熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为n的。对脓汁屮的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜卜•菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌

2、的菌属。然后，对可疑菌落纯培养，通过不同牛•化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。（具体见图1-1）脓汁标本直接锐检链球菌属葡萄球菌属V血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验奈瑟菌属麦芽糖发酵试验W性—金黄色葡萄球菌伪性——口色葡萄球卄困W性——肺炎链球菌阴性——甲型溶血性链球卄困W性—淋病奈瑟菌初性—脑膜炎奈瑟菌图1-1二、鉴定方法（-）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈匍萄串状排列。链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆

3、形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。肺炎链球菌貝•有荚膜双球的典型形态。奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于屮性粒细胞内外分布。通过总接镜检可以确定脓汁标木中细菌的菌属。在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37°C的条件下培养18〜48小时。观察菌落的形态。葡萄球菌属：在

4、血平板上形成圆形凸起、表血光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有B溶血现彖。链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。不同类样有不同的溶血现象，包括a、B、Y三种。肺炎链球菌在血平板上形成灰口色、略扁平、半透明的细小菌落，菌落周围有a溶血现象。培养吋间超过48小吋，菌落中央会出现脐状下陷。奈瑟菌属：脑膜炎奈瑟菌在巧克力琼脂平板上，形成无色、圆形、凸起、光滑、透明似露滴状菌落，培养时间超过48小时常死亡。淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上培

5、养48小时,形成灰白色、圆形、凸起、表面湿润冇光泽的细小菌落。通过在血平板上形成的菌落的不同，可以做出进一步诊断。并可挑取町疑菌落再次镜检,无杂菌后进行纯培养再通过生化反应鉴别。（三）生化反应1、血浆凝固酶试验血浆凝固酶是致病性衙萄球菌产牛的，可使含有肝素或枸椽酸钠抗凝剂的人或兔血浆发牛凝固的酶类物质，是判断葡萄球菌致病性的最重耍指标。游离凝固酶川试管法检测，结合凝固酶用玻片法测试。通过血浆凝固酶试验可以对葡萄球菌属的纯培养物做岀鉴别。【材料】被测菌培养物；加抗凝剂的1:2稀释的人或兔血浆；载玻片、接种环、小试管等。【方

6、法】试管法：在盛有血浆0.5ml的试管中，接种被测菌培养物，置于温箱内1~4小时后，观察血浆状态。流动性变差或出现凝固为阳性。玻片法：去加抗凝的血浆滴于载玻片上，在血琼脂平板上取被测菌落与血浆混匀。观察,如果出现乳白色颗粒即为试验阳性。反之，均匀无颗粒者，为试验阴性。【结果】试验阳性说明可疑菌落为金黄色匍萄球菌菌落，试验阴性说明可疑菌落为门色匍萄球菌。2、胆•汁溶菌试验胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由丁•胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌木身自溶过程，促使细菌发生自溶。

7、利用这--现象可以对链球菌属的纯培养物做出鉴别。【材料】10%去氧胆酸钠或纯牛胆汁、被测菌培养物；小试管、接种环等。【方法】平板法：取10%去氧胆酸钠溶液一•接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35°C30min后观察结果。菌落消失为实验阳性，反Z为阴性。试管法：被测菌培养物2支，各0.9ml,分別加入10%去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml,摇匀后置35°C水浴10〜30min,观察结果。加胆盐的培养物变透明，而对照管仍混浊判为阳性。【结果】试验阳性说明被测菌为肺炎链球菌。3、麦芽糖发酵试验该实验通过将细菌标本接

8、种于内含倒置小管的单糖发酵管中，用滉甲酚紫作指示剂，培养示观察发酵管内指示剂的颜色变化及倒置小管的产气情况，判断细菌对不同单糖分解利用能力。人多数的脑膜炎奈瑟菌能分解利用麦芽糖产酸不产气而淋病奈瑟菌则不行，利用这一原理可以对奈瑟菌属的纯培养物进行鉴别。【材料】单糖发酵管（麦芽糖）、指示剂、被测菌培养物等。【方法】以无