RNA干扰途径在肝癌治疗中的应用

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1、RNA干扰途径在肝癌治疗中的应用摘要：在全球范围内，肝癌是笫5大常见的恶性肿瘤，也是导致人类死亡的主要因素乙一。目前，几乎没有针对肝癌的有效治疗手段。I大I此，发展一•种新手段意义重大。RNA干扰技术(RNAinterference,RNAi)作为一种棊因沉默技术，能高效H特异地抑制相关基因的表达，为肝癌的基因治疗提供了新的手段和希望。对近儿年RNAi技术在肝癌领域的应用进行综述。关键词：RNA干扰技术:肝癌；基因治疗RNA干扰(RNAi)是一种高效、特异的反转录基因沉默过程。当外源性dsRNA进入细胞后，即被细胞内核酸酶所识别，并被切割为21

2、-23个核昔酸的短双链RNA,即siRNA。siRNA与RNA介导的沉默复合体(RNAinducedsilencingcomplex,RISC)结合后，识别并降解同源的mRNA,特异性抑制目的基因的表达。尤其是可抑制某些肿瘤基因和抗凋亡基因的表达，导致细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖［1］。原发性肝癌(PLC)是世界上常见的恶性肿瘤之一，居于恶性肿瘤的第5位，全球发病率己超过100万/年。我国一直是世界范围内的PLC高发区，目前的发病人数约34.7万人,约占全球总发病人数的55%；死亡约32.3万人，约占全球总死亡人数的45%。在全球，PLC在恶性肿

3、瘤死亡中仅次于胃癌和食管癌，而在我国仅次于肺癌，位居第二［2］。因其恶性度高、病情进展快，大部分PLC患者就诊时已为晚期，不适合手术切除。在肝癌治疗小，运用siRNA技术构建相应的siRNA载体，分别作用于与肝癌发生相关的癌基因、抑癌基因及其他相关因子等，可在一定程度上抑制癌基因表达、抑癌基因突变、细胞周期素的过度表达、过度表达的生长因子和受体以及川:癌细胞的侵袭转移能力。这些方的研究均取得了可喜的成果，部分研究已从体外试验过渡到体内试验，为肝癌的临床治疗奠定了基础。siRNA技术为肝癌以及其他肿瘤的治疗开辟了一条新途径。！＜是近几年发展起来的

4、一种特异性抑制基因表达的新方法，通过导人一段与内源基因同源的双链！序列，使内源T!降解，达到抑制基因表达的目的。!*操作的简单性和对靶基因表达抑制的高效性使英成为研究基因功能的有力手段，并能选择性地抑制人类疾病相关基因的衣达，为肿瘤等疾病的基因治疗带来新的希與。本文就近年来！干扰技术在肝癌研究屮的应川作一综述。1.RNAi概述1.1RNAi的发现1995年,Guo等⑶在实验中意外发现：将RNA转染到秀丽隐杆线虫(C.elegans)体内后，某些基因表达受到抑制。1998年，Fire等［4］发现将很少量的双链RNA(dsRNA)注入秀丽隐杆线山体

5、内，即町高效、特异地阻断抑制与dsRNA同源的基因表达，产生使相应基因抑制的转录后基因沉默现彖，并将一现象称Z为RNAio1.2RNAi的作用机制RNAi的机制主要有两种：人于30nt的长链RNA的非特异效应和21〜23nt的短链RNA的特异效应。RNAi特异效应发生在三个水平：转录后水平、转录水平、翻译水平。前两者［tlsiRNA(shortinterferingRNA)/shRNA(shorthairpinRNA)介导，翻译水平rhmicroRNA介导。RNAi的作用机制基本步骤包括起始阶段和效应阶段。起始阶段，即长dsRNA被称为Dice

6、r的核酸内切酶切割成21-25nt的短双链片段(siRNA)。siRNA双链3'端为疑基末端,且有两个不配对的碱棊，此结构可能对siRNA进入蛋白复合体是必须的，两端的5'磷酸盐是真正的siRNA和细胞其他dsRNA赖以区分的结构基础。另外，siRNA的5'磷酸盐可能充当靶RNA裂解位点的--种分子参照。1.1RNAi作用的特征RNAi过程有以下特征：①高效性：少量dsRNA即可有效抑制基因表达。②特异性：小干扰RNA只会使靶基因失活，能够特异地降解与之序列相应的单个内源基的mRNA,対其他基因没有沉默作用。③稳定性：以3'端悬垂TT或UU碱基

7、的双链RNA比较稳定，不再需要进行任何修饰。④浓度依赖性：dsRNA诱发的RNA干扰效应的强度随浓度的增高而增强⑤吋间效应性：RNAT扰在注入dsRNA2〜3d后作用最强；而随后1〜2d内，就能恢复到T扰以前的水平[5]。⑥dsRNA需要一个故小的长度才能产生有效的干扰效果，dsRNA片段如小于21-23nt„特异性将显著降低，不能保证不与细胞内非靶向基因相互作用，如远远大于21-23nt,互补序列对能延伸，超出抑制范围。⑦是转录后水平的基因沉默，注入该基因的内含子或启动子顺序的双链RNA都没有干涉效应，翻译抑制剂对RNA干扰不产生影响。2RN

8、Ai在肝癌研究中的进展2.1RNAi抗HBV、HCV方面的研究肝癌的发病率与与HBV、HCV感染相关，因此，对乙型、丙型肝炎的有效治疗有助于减少HCC