细菌与真菌学实验指导书

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1、细菌与真菌学实验实验一细菌形态结构观察【目的】1、了解细菌的基本形态和特殊结构观察法2、明确细菌特殊结构在医疗实践中的意义3、细菌不染色标木的观察方法4、观察活细菌的形态及运动情况【材料】革兰染色标木片：1、球菌：葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌。2、杆菌：伤寒沙门菌、大肠埃希菌、炭疽芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌。3、螺形菌：霍乱弧菌或水弧菌。细菌特殊结构标本片：1、鞭毛:变形杆菌、霍乱弧菌2、荚膜:肺炎链球菌、产气荚膜杆菌3、芽他：破伤风杆菌、炭疽杆菌细菌动力观察材料：1、菌种：普通变形杆菌、表皮葡萄球菌。2、变形杆菌和表皮葡萄球菌8〜12min肉汤培养物。3、其他：

2、凹玻片、盖玻片、凡士林、牙签、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸一细菌形态结果观察SBhhbsk1、使用油镜观察上述革兰染色标本片：认识细菌的三种基本形态。注意观察各菌的形态、大小、排列方式及染色性等特点。2、使用油镜观察细菌的特殊结构标木片：（1）荚膜：肺炎链球菌经革兰染色后，呈矛头状成双排列，菌体四周有不着色的透明圈（既荚膜）；肺炎链球菌与产气荚膜杆菌的荚膜（荚膜染色法），注意观察菌体及荚膜的颜色及两者的形态特点。（2）鞭毛：变形杆菌与霍乱弧菌的鞭毛（鞭毛染色法），注意观察菌体和鞭毛的颜色、鞭毛的长短、数目及在菌体上的位置。（3）芽胞：破伤风梭菌及炭疽杆菌芽胞（芽胞

3、染色法），注意观察菌体、芽砲的形态、颜色及芽抱在菌体中的位置。细菌不染色标本观察法（动力观察法）1、悬滴法图2-1-1（1）取一张洁净盖玻片，用牙签涂少许凡士林于盖玻片的四个角处。（2）用接种环取3〜4环普通变形杆菌或表皮葡萄球菌液体培养物于盖玻片中央。（3）把凹玻片凹面朝下盖在盖玻片上，使凹窝中央正对菌液（见图2-1-1）O（4）迅速翻转凹玻片，使粘附在F1玻片上的盖玻片朝上。（5）先用低倍镜观察，再换高倍镜观察。图2-1-1悬滴法普通变形杆菌有鞭毛，运动活泼，可向不同方向迅速运动。表皮葡萄球菌无鞭毛，不能作真正运动，只能在一定范围内作移位不大的颤动，这是受水分子撞击而呈

4、分子运动（即布朗运动）o2、压滴法（1）用接种环取3〜4环菌液于洁净载玻片屮央。（2）用小铁了挟一块盖玻片轻轻覆盖在载玻片的菌液上，放置盖玻片时,应将盖玻片的一端接触载玻片，然后缓慢放下，以免菌液屮产生气泡。（3）先用低倍镜对光找到细菌的位置，再换高倍镜观察细菌的运动。【思考题】1、在油镜卜•你看到了细菌有几种特殊机构？能否看到细菌菌毛？2、细菌特殊结构在医学上有何意义？3、细菌的动力检查有何意义？实验二细菌涂片标本的制备及革兰染色法【口的】1、掌握细菌涂片标本的制备和革兰染色法。2、了解革兰染色法的意义。【原理】1、细胞琏结构学说：革兰阳性菌细胞琏结构较致密，肽聚糖层厚，

5、脂质含量少，乙醇不易渗入；革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇容易渗入。2、等电点学说：革兰阳性菌等电点（pH2〜3）比革兰阴性菌等电点（pH4〜5）低，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，故与带正电荷的结晶紫染料结合牢固，不易被95%乙醇脱色。3、化学学说：革兰阳性菌菌体含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合成大分了复合物，使已经着色的细菌不被95%乙醇脱色；革兰阴性菌菌体含核糖核酸镁盐很少，故容易被95%乙醇脱色。【材料】1、菌种：大肠埃希菌、葡萄球菌。2、染液:革兰染色液一套：结晶紫染液、碘液、95%乙醇、稀释石炭酸复红染液。

6、3、玻片、生理盐水、酒精灯、吸水纸、接种环、玻璃蜡笔、香柏油等。【方法】一细菌涂片制备1、涂片：取一张洁净载玻片，用玻璃蜡笔在洁净载玻片上标记，于玻片两端各滴1滴生理盐水，不耍太靠近玻片边沿。接种环在火焰上灭菌后，分别挑取少量葡萄球菌和人肠埃希菌于玻片两端的生理盐水中，并研磨成均匀混浊的菌液（如系液体标本，则不需加生理盐水，可直接涂于载玻片上），涂成约1cmXlcm大小的均匀薄膜，接种环灭菌后放回试管架上。2、干燥：涂片最好在室温下自然干燥，如欲加速干燥，也可将涂膜背面置火焰上方不烤手的高处略加烘烤，但切勿紧靠火焰，以免将涂膜烤焦，细菌变形，染色后难以观察。3、固定：涂片干

7、燥后，手持玻片的一端，将载玻片的背面往返通过酒精灯火焰三次，共约2〜3秒钟，注意温度不可太高，以玻片加温而触及皮肤感觉烫而尚能忍受为度。固定的目的一是杀死细菌，二是使菌体与玻片粘附牢固，以免玻片上的细菌在染色过程中被水冲洗掉，三是固定后细菌蛋白质变性易被着色。固定完毕，放置待冷后再进行染色。注••无论何种染色,涂片均不可太厚,一定涂成薄膜;取第二个菌Z前,一定要注意灭菌,否则两菌混淆;最好取湿润的菌落,便于将细菌混匀。二革兰染色法1、初染：将固定好的细菌涂片放在染色架上，滴加结晶紫染液2〜3滴，以全面覆盖涂膜为度，