环境微生物实验指导内容-生命科学学院本科基础实验教学中心

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1、第一部分基础实验实验一显微镜的基本构造、使用和保养—、目的要求1•熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能。2.学习并掌握汕镜的原理和使用方法。二、显微镜的基本构造显微镜是由机械装直和光学系统两人部分组成。1.机械装置镜座(base)和镜臂(arm)镜座位于显微镜底部，呈马蹄形，它支持全镜。镜臂冇固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角度。镜臂支持镜筒。镜筒(bodytube)是山金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器。镜筒有单筒和双筒两种，单筒又可分为直立式和后倾式两种。而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜45°。双筒中的一个目镜有屈光度调节装置

2、，以备在两眼视力不同的情况下调节使用。转换器(noscpioco)为两个金属碟所合成的一个转盘，其上装3—4个物镜，口J使每个物镜通过镜筒与目镜构成一个放大系统。载物台(stage)又称镜台，为方形或圆形的盘，用以载放被检物体，中心有一个通光孔。在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本推动器，将标本I古I定厉，能向前后左右推动。有的推动器上还有刻度，能确定标木的位置，便于找到变换的视野。调焦装置是调节物镜和标本间距离的机件，冇粗动螺旋(coarseadjustment)即粗调节器和微动螺旋(fineadjustment

3、)即细调节器,利用它们使镜筒或镜台上下移动,当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像。2.光学系统物镜(objective)物镜女装在镜筒下端的转换器上，因接近被观察的物体，故又称接物镜。其作用是将物体作笫一次放大，是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜上通常标冇数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数。如：NA0.30；10X；160/0.17；16nun。其中"NA0.30”表示数值孔径(numericalaperture,简写为NA),"10X”表示放大倍数,“160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度(mm),“16m

4、m”表示焦距。目镜(coularlens)装于镜筒上端，由两块透镜组成。目镜把物镜造成的像再次放大,不增加分辨力，上面一般标有7X、10X、15X等放大倍数，可根据需要选用。一般町按与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的500-700倍，最大也不能超过1000倍的选择。目镜的放大倍数过大，反而影响观察效果。聚光器(condenser)光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射标本，增强明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚光器III聚光镜和虹彩光圈(irisdiaphragm)组成，聚光镜由透镜组成。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动

5、把手可随意调鹤透进光的强弱。调节聚光镜的髙度和虹彩光圈的大小，可得到适当的光照和淸晰的图像。光源(lightsource)较新式的显微镜其光源通常是女装在显微镜的镜座内，通过按扭开关來控制；老式的显微镜人多是采川附着在镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和話倍镜观察时，用平面反光镜；使用油镜或光线弱时可用凹而反光镜。滤光片(filter)可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线波长不同。如只需某—•波长的光线时，就要用滤光片。选用适当的滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿

6、、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长的可见光,可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片。三、器材显微镜、擦镜纸、香柏汕、二甲苯、染色玻片标本四、显微镜的使用(1)安放显微镜打开镜箱，右手紧握镜臂，左手平托镜座，轻放桌上，距离桌子边缘儿厘米处，使日镜对着观察者。（2）检查检查各部件是否完好，镜少、镜头必须清洁。（3）对光配置内置式电光源的显微镜可直接打开电源开关，并调节光量，使视野内的亮度达到明暗适宜，同时打开光圈。1（1式显微镜应首先将虹彩光圈的孔径调至最大，将聚光器升至最高点，再将低倍镜对准镜台孔，镜头离载物台约1cm。这时，把反

7、光镜转向光源,直到视野中的光线既明亮又均匀时为止。在镜检全过程中，根据所需光线的强弱，还可通过扩人或缩小光圈、升降聚光器加以调节。（4）调焦光线对好后，将玻片标本放在镜台上，有盖玻片的一面朝上，被检物体对准镜台孔正中，川标木移动器上的压片夹卡紧，然后调焦。转动粗调焦螺旋调节镜台与物镜间的距离，从侧面注视，以二者间距离5nmi为度。然后自H镜观察，慢慢转动粗调焦螺旋,同时移动标本移动器，直到基本看清标本物像。（5）低倍镜观察用粗调焦螺旋调焦后，再轻轻转动细调焦螺旋，以便得到清晰的物像。如果观察的H标不在视野中央，可调节标本移动器，使Z恰好位于视野

8、小央。若光线不适，可拨动虹彩光圈的操纵杆，调节光线至适宜。（6）高倍镜观察在低倍镜下将观察的标本部分移至视野中央，再转动镜头转换器，将窩倍物镜转至工作