蒋玉祥本科毕业论文

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1、分类号密级五号)UDC本科毕业论文七鲤'鳗(Petromyzonmarinus)类胰岛素生长因子结合蛋白3的基因结构和功能研究学生姓名蒋玉祥学号040012006029指导教师周建峰教授院'系、中心海洋生命学院专业年级06生物化学与分子生物学论文答辩日期年月日中国海洋大学七鲤鳗｛Petromyzonmarinus｝类胰岛素生长因子结合蛋白3的基因结构和功能研究完成日期：指导教师签字：答辩小组成员签字：七鲤鳗^Petromyzonmarinus)类胰岛素生长因子结合蛋白3的基因结构和功能研究摘要IGF结合蛋白(IGFBP)-3是一种细胞外分泌蛋白，它

2、能结合并调控IGF信号。IGFBP-3在培养的哺乳动物细胞中还会表现出配体非依赖的功能。除了IGF结合域(IBD),哺乳动物IGFBP・3还有一个核定位信号(NLS)和转录激活域(TA)。但是,IGFBP-3的这些结构域的体内功能尚不明确。本研究显示在无颌类七鲍鳗IGFBP-3中这些结构域在进化上也是保守的，其中IGFBP-3ORF1含IGF结合结构域、核定位信号和转录激活结构或分别可以与IGF结合、能定位于细胞核，有转录激活活性。通过构建数个IGFBP-3ORF1突变体来研究其功能，显微注射IGFBP-3ORF1和突变体的mRNA可使斑马鱼的胚胎

3、背部化，发现这种背部化作用是IGF非依赖性的，并且不依赖于核定位信号和转录激活结构域。关键词：七鲤鳗IGFIGFBP-3突变体GenestructureandfunctionstudyoflGFBP3insealamprey(Petromyzonmarinus)AbstractIGFbindingprotein(IGFBP)-3isasecretedproteinthatbindsandmodulatesIGFactionsinextracellularenvironments.IGFBP・3alsohasligand-independentact

4、ionsinculturedmammaliancells.InadditiontoitsIGFbindingdomain(IBD),mammalianIGFBP-3hasafunctionalnuclearlocalizationsignal(NLS)andti*ansactivationdomain(TA).ThespecificrolesofthesestructuraldomainsofIGFBP-3inmediatingitsinvivoactionsareunclear.Thestudyshowsinsealampreythedomain

5、sofIGFBP3areevolutionarilyconserved.Tostudythefunctionalrolesofthesedomains,severalIGFBP-3ORF1mutantswereengineered.TheIBDmutantfailedtobindIGF-Ibuthadnormalnuclearlocalization.TheNLSmutanthadgreatlyreducednuclearlocalizationbutshowednormalIGFbinding.TheIBD+NLSdoublemutanthadi

6、mpairedIGFbindingandnuclearlocalization.Whenexpressedinzebrafishembryos,wild-typeIGFBP-3,NLS,andTAmutantshadstrongdorsalizingeffects.TheactivitiesoftheIBDmutantandtheIBD+NLSmutantweresignificantlylower,suggestingthatIGFBP-3actsinIGF・dependentand-independentmannersandthattheIGF

7、-independentactionisnotrelatedtoitsnuclearlocalizationortransactivationactivity.Keywords:sealampreyIGFIGFBP3mutant目录1文龊就1IGF信号通路系统11.1.1TGF信号爾系统雌11.1.2IGFBP-3概述21.2七鲍鳗与基因倍增41.2.1七鲤鳗腿41.2.2基因倍增41.3本研究的目的和意义62材料和方法82.1化学卿82.2实验仪器82.3实验材料92.4Blast分析和序列上闵92.5IGFBP-3的系魏化分析92.6突变体质粒

8、构建92.7细胞培养和转染102.BWestern免疫E卩迹112.9酉己体E卩i変112.10统计分析133实验结果14