结核抗体金标阵列检测试剂盒作业指导书

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1、结核抗体金标阵列检测试剂盒作业指导书1目的建立结核抗体金标阵列检测试剂盒作业指导书，确保生产过程处于受控状态。2范围适用于结核抗体金标阵列检测试剂盒相关工序的操作者。3职责3.1操作人员应严格执行本作业指导书。3.2生产主管负责监督检查。3.3质检部质检员负责抽查执行情况。4工作内容4.1生产工艺流程图NC反应膜检涮NC膜包被抗原检测重原达核抗表结组的NO膜处理NC膜检测兔抗鼠抗IgG抗体体制备检►测注：探关键过程★特殊过程4.2作业内容4.2.1胶体金制备（柠檬酸三钠还原法）氯金酸（HAuClJ水溶液放入三角瓶内加热至沸腾一加热柠檬酸三钠溶液一混匀，搅拌煮沸10至15分钟一待胶体金溶

2、液颜色由蓝一紫一红，冷却即可。4.2.2金标抗体（反应膜）制备以0.1M碳酸钾溶液调胶体金溶液pH8.0-9.0-＞加入抗人IgM单抗，15分钟后加入聚乙二醇一离心，调532nm测OD值5〜10,方阵滴定法选定标记工作浓度一用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。4.2.3金标抗体反应膜质检将制备好的金标抗体反应膜按5%。比例抽检，与标准反映膜匹配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测：a）符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性；b）反应强度：+/+++邙口性反应线/阴性反应线）；c）反应时间:30s〜5mino确认合格后才能转入下一工序。4.2.4NC反应膜

3、制备亲和性高分子硝酸纤维素膜一活化处理12小时一用水洗5次，每次20分钟一室温干燥后一取纯化Cpn重组结核抗原16kd和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml,用Cpn重组结核抗原在NC膜上包被结核抗体阳性检测线Tl-＞取纯化Cpn重组结核抗原38kd和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml,用Cpn重组结核抗原在NC膜上包被结核抗体阳性检测线T2-用兔抗鼠IgG抗体在NC膜上包被对照线一干燥后，用BS液封闭，HbO清洗后，室温干燥，备用。4.2.4NC反应膜质检4.2.5.1常规图形模式检测：将制备好的反应膜按5%。比例抽检，与标准金标抗体反应膜匹配组装成

4、品，同时与标准成品对照检测；观察阳性、阴性包被线及本底，要求图形规则程度均匀，无遗漏或重复包被。4.2.5.2均一性、符合率筛选：按3%比例/批，随机取样，每张5〜10人份，作阴性质控品和结核阳性血清的阳性质控品检测，无假阳性和假阴性，均一性$98%。4.2.6反应体系组装组装材料材料规格(mm)组装方式反应膜(S1)20见图1无纺布(S2)25,30吸水纸(S3)30金标反应膜(S4)10双面胶带(S5)29,48塑料垫板S678单面胶带S715图4.2.6.1反应体组装程序：a)在S6塑料基板上贴双面胶带S5(29,48mm)二条;b)在S5上贴反应膜SI(20mm),S1上下缘距

5、S6上下缘各29mm；c)在S6上贴吸水纸S3(30mm),吸水纸下缘与S1上缘交接1mm,上缘与S5的上边缘对齐；d)在S5下端贴无纺布S2-1,其上缘压住S1下缘1mm；e)在S2-1±平放金标抗体反应膜S4(10mm)上缘对齐；f)在S4上平放无纺布S2・2(30mm)上下缘分别S4、S6对齐；g)将组装成型的反应体系用电脑可调式切割机切成4.2mm测试条，装入干燥器，待包装。4.2.6.2成品包装：每支成品先装聚苯乙烯塑料外壳，再用镀铝膜包装加干燥剂,附说明书，打批号入库，每批留样100人份，以备复检.4.2.7参比品制备4.2.7.1结核抗体血清质控品取临床确诊结核病人（临床

6、症状明显、结核培养阳性）血清15份，间接ELISA测定结核抗体阳性，0D49220.3,混合血清加防腐剂，分装・70°C保存。4.2.7.2结核阴性血清质控品取健康人血清（体查健康，培养法和间接ELISA测定结核抗体均阴性，OD492<0.10）15份，混合血清加防腐剂，分装・70°C保存。4.3成品检测产品技术要求应符合《结核抗体金标阵列检测试剂盒》产品注册标准要求。4.3.1外观431」要求a）检测条：表面应平整、无划伤、开裂、变形及污渍；检测卡各组分附着牢固、内容齐全；b）检测卡：外壳应平整，上下盖应均匀合拢，无明显间隙；反应试条在外壳内应附着牢固；4.3.1.2检验在自然光线下

7、，用手感和目视观察方法进行检验。4.3.2符合率4.3.2.1阴性符合率4.3.2.1.1要求试剂卡测试结核抗体阴性质控血清10份，假阳性判断结果不多于1份，符合率应290%。4.3.2.1.2测试a）试剂1）样品稀释液；2）测定样品液：结核抗体阴性质控血清。b）测定方法随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阴性质控血清10份。测定时取10M阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100M样品稀释液，平放，等待3〜5分钟观察检测卡中部检视窗的