植物遗传育种实验指导书

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1、实验一根尖细胞有丝分裂涂抹制片法一、实验目的与要求学习植物细胞涂抹制片技术；观察有丝分裂过程中染色体行为。二、实验原理各种旺盛生长的植物组织，包括：茎尖、根尖、砲原组织等分生组织、愈伤组织及分化的小抱了、萌发的花粉管，经常进行着细胞分裂。经过适当的取材处理，制片后可进行有丝分裂屮染色体动态的观察，这是遗传学上通过细胞分裂观察染色体行为、形态结构、数从而进行组织分析，鉴别杂种等常用的制片方法。三、实验材料与设备实验材料：中国水仙、风信子、柴万年青、郁金香(SX)o用具和试剂:蹑子、解剖针、盖片、载片、滤纸、单刃刀片对氯苯饱和溶液、1NHC1.醋酸地衣红、中性树

2、胶，卡诺固定液。U!实验步骤1•予处理：实验前将鳞茎水培，待根长出久1〜1.5cm时，剪取0.5cm长的根尖，立即放入对二氯苯饱和水溶液屮，在室温下处理2小时左右，予处理的作用主耍是浓缩色体,使之分散，同时抑制纺纟垂丝形成。在制片过程中，如发现染色体后期的分裂相较多时，说明予处理时间不够。2.固定：倒掉对氯二苯溶液，用水冲洗两遍，用新配的卡诺固定液固定24h后，可放入冰箱屮备用。如果要长期保存则要将根尖转入70%的酒精屮。3.解离：先将固定后的根尖用蒸馆水换洗3〜4次，再用1NHC1在60°C(注意要严格控制不超过±5°C)的恒温水浴锅中处理10〜20min

3、,然后用蒸镭水换洗3〜4次。此步主要是使细胞之间分散开，并软化细胞壁，便于压片，同时也利于染色。4.染色制片(1)切片：剔除根冠，在生长锥处切下一小块组织。(2)染色压片：在切下的组织上滴一滴醋酸地衣红，捣碎，除去大块的渣滓，盖上擦干净的盖玻片，覆一层吸水纸，用食指在上面施加少量压力，勿使盖片移动，用解剖针柄轻敲，可使细胞舒展，染色体散开。好的片子放置显微镜卜•检查，看到有典型的分裂图像时，可把载玻片在酒精灯上往往返烘烤。2.脱盖片：先在制片上做好记号，以便于封片时按原位复上，在致冷调节器的冷却台上冷冻，用蹑子和单刃刀片慢慢起下來。6•封丿X冰冻脱下的盖片自

4、然干燥后，直接用加拿大树胶或DDPX中性胶封片。注意树胶用量要适当，以正好布满盖片为宜；覆盖盖片时勿太快，防止气泡产生，盖片务必原位复上。中零后硏耒朋附录I:植物细胞有丝分裂过程耍点有丝分裂是一个连续过程，为了研究和描述方便，一•般把它分为：间期、前期、中期和未期。①间期：(Interphase)是分裂前的准备时期，核内发生着一系裂的生化变化，主要是DNA复制和能量的积累，以保证分裂的进行，在分裂间期，细胞核的结构具有明显的核膜、核仁及染色质或染色质丝。②前期(Prophase):核内染色质粒或染色质丝逐渐汇合并缩短变形成染色体。每一染色体纵裂为二，着丝点不

5、分开。核仁、核膜消失，两极出现纺纯丝。③屮期(metaphase):染色体向赤道移动，最终有规律地排列细胞屮部的赤道而上，由两极伸出的纺纟垂丝与染色体上的着丝点相连形成纺纟垂体。①后期(anaphase):条染色体的着丝粒分裂为二。每条染色单体都具有口己的着丝点。纵裂的染色体单体被纺纟垂•丝拉向两极。呈1型和丁型。②未期(telophase)：两组子染色体到达两极，染色体螺旋结构消失，核仁、核膜重新出现,纺纯体消失。③胞质分割(cytokinesis)：位于赤道板的纺纯丝逐渐收缩增厚形成细胞板，最后成为细胞膜，一个细胞被分隔成两个子细胞。有丝分裂结束。五、作

6、业观察染色体数口，绘制你所看到的图象，并说明属于有丝分裂哪一时期。实验二园林植物的引种计划制定实验目的与要求通过制定园林植物引种计划，加深对理论知识的理解，熟悉引种工作的各项环节，提高组织、领导开展引种工作的实践能力，达到能独立设计园林植物的引种方案，科学有效地进行引种试验的忖的。二、实验原理不同园林植物种类或品种，对自然条件都有一-定的要求，如果得不到满足，生长发育将会受到影响。引种时，要考虑生长地的气候条件，尽可能从纬度、海拔高度、土质条件相似的地区引利I。同时还要考虑植物种类的适应性人小以及引入地的栽培管理条件和人的主观能动性等因素。植物适应性的大小，

7、不仅与冃前分布区的生态条件有关，而且与系统发育小历史上的生态条件有关。三、实验材料与设备借助图书馆、资料室、计算机房（1）题目：临沂地区香樟树的引种⑵资料来源：①图书馆、资料室查阅拟引进植物（品种）的主要特性、选育历史、适宜的生态环境、栽培技术等有关文献资料。②实际调查（有条件时）。五、实验内容收集、分析引种材料原产地及引入地的具体资料，进一步审定选题的正确性与引种的可行性。最后根据查阅的相关资料，制定出引种计划。六、方法与步骤（一）收集（或调查）并整理以下方面的资料Q）收集有关香樟树的分布、经济栽培意义、生物学特性及系统发育历史等方面的相关资料。⑵收集有关

8、香樟树原产地的地理、气候、土壤、植被组成等资料。（3