作物遗传育种实验指导书

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1、生物工程学院实验教案作扬遗條育种实验捅导吊生物技术教研室实验一水稻发芽培养基和试剂的制备一、实验目的：掌握水稻发芽所需要的培养基的配制和灭菌方法以及其他试剂的制备。二、材料与用具：1、药品：生长调节类物质、无机盐类、有机化合物，升汞、琼脂、白糖、NaOH.PH试纸、75%酒精、蒸憾水等。2、用具：分析天平、移液管、量筒、培养瓶、烧杯、冰箱、母液瓶、电炉、灭菌锅等。二、教学时数：4课时。四、实验内容（-）培养基和其它试剂的制备：1、培养基的配制1）配制各种母液；2）按配方要求称好6-10g/L琼脂放入锅屮，加入

2、2/3-3/4终体积的水，加热煮化，一般先用旺火烧开，再用文火煮溶，并注意经常搅拌，防止糊底；3）按配方要求称好15-30g/L糖，待琼脂加热溶化后加入；4）根据培养基配方，按照各种母液顺序和规定量，用移液管吸或量筒取母液，放在烧杯中，待琼脂和糖充分溶解后加入；5）加水定容，并充分混匀；6）用0.lmol/L的HC1或NaOH调整PH至规定范围;7）将培养基分装至培养容器内，每瓶培养基深度保持在lcm左右；8）封口，并准备灭菌。2、其它试剂的制备1）配制0.15%的升汞溶液；2）配制75%的酒精3）分装蒸憎水

3、。（二）培养基和蒸懈水的灭菌：1、打开锅盖，加水至水位线；2、把已装好培养基的培养瓶，连同蒸憾水放人锅内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出，且物品体积不大于锅内总体积的80%；3、盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热；4、打开安全阀和排气阀排放冷气，至大量白色蒸汽冒出时关闭加压升温，或者关闭安全阀和排气阀，当压力升至0.05MPa时，打开放气阀放气至犬量白色蒸汽冒出吋关闭加压等温；5、当气压上升到121°C时，保持在121-125°C之间灭菌20min左右,停止加执.八、、、6、由慢到快缓慢排气，

4、当气压冋〃0〃后打开锅盖，取出培养基，放于无菌空间的平台上冷凝备用。五、实验相关记录水稻发芽培养基MS大量元素（10*）50mlMS微量元素（100*）5ml铁盐（100*）10ml维生素（100*）10ml加水至1000ml实验二水稻种子的消毒和发芽一、实验目的掌握水稻在培养基上发芽时的消毒过程二、材料和用具水稻种子、灭菌培养基、灭菌水、0.15%的升汞、75%乙醇、50ml离心管、蹑子二、教学时数4课时四、实验内容1.将去壳的水稻种子放入50m离心管中，加入75%乙醇10ml处理1分钟。2•倒掉75%乙醇

5、,加入0.15%的升汞10ml处理15分钟。3.将升汞倒回试剂瓶，用灭菌水清洗种了8-10次。4.将消毒的种子放入培养基上，注意种子之间的间隔。五、实验相关记录实验三水稻种子发芽特性观察一、实验目的观察不同温度和水分（氧气）条件下稻种的发芽情况。了解水稻种子的发芽特性及其与外界环境条件的关系。二、实验内容具备冇发芽能力的水稻种子在一定水分、温度和氧气条件下，即能萌发生长。种了吸收水分以后，在30-35°C条件下发芽较快，但根芽生长受氧气供应程度的影响较大。氧气充足时，先长根，而水分充足氧气缺乏时，则芽鞘先伸长

6、。因此掌握适宜的温度，水分（氧气）条件进行催芽，才能达到芽齐、芽壮，为培育壮秧打好基础。三、材料及用具制、粳型水稻种子，恒温箱，冰箱，发芽皿，定性滤纸，玻璃水缸，温度计和银子等。四、实验时数4课时五、方法与步骤（-）不同温度条件发芽速度的观察将经过选种（风选或溶液选）后的种子事先浸种2-3天让其它充分吸收水分。实验时，数釉、粳种子各三份，每份100粒，放入6个垫有三层吸水纸的培养皿屮，分别置于10°C、25°C、35°C的恒温箱（或冰箱）中，以后每天观察记载一次发芽粒数，计算发芽率。发芽结束时，对不同温度处理

7、分别测量10个发芽种子的根、芽长度，求其平均值，并作出记载。（二）不同水分、氧气对根、芽生长的影响将釉、粳种子事先破胸，取上述种子各50粒，分别置于玻璃缸（或烧杯）内，灌水8・10cm深；另数取釉、粳破胸谷100粒，放入垫有吸水纸的培养皿中，加水保持湿润，然后将上述处理的种子，同置入30°C或35°C的恒温箱中发芽，2天后观察根、芽生长情况，4天后,取齐种处理稻谷10粒，分别量根、芽长度，求出平均数。六、实验相关记录1.列表说明不同温度条件下的发芽速度和根、芽比例，比较釉、粳稻的差异。2.列表比较不同水分条件

8、下根、芽生长的情况。实验四水稻品种资源的认识和鉴别一、实验目的掌握粳稻和釉稻的鉴别方法二、材料和用具釉稻和粳稻种子、1%石碳酸溶液、手提放大镜、直尺三、实验学时4课吋四、实验内容1、粒形观察：取制I、粳谷粒，目测粒形，用手提放大镜观察殍毛分布情况，用直尺10粒谷的长宽（重复3次，取平均数）。2、石碳酸染色反应：取釉稻、粳谷粒各100粒，先浸清水6小时，再浸入1%右碳酸溶液屮12小时，取出用水冲洗，置