无菌检查法标准操作规程

《无菌检查法标准操作规程》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、1.冃的建立要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种检查方法。2.范围适川于无菌检验。3.职责检验员按本规程操作，质量控制部主管监怦本规程的实施。4.程序4.1检验依据中国药品检验标准操作规范中华人民共和国费典二部附录XIII无菌检查法4.2仪器、设备立式压力蒸汽灭菌器、数显鼓风T燥箱、净化工作台、试管、量筒、酒梢灯、烧杯、电磁炉、试管架、剪刀、移液管、银了、接种环、电了秤、培养箱、试管架、大试管若干、冰箱、移液枪等。4.3培养基4.3.1培养基种类及培养条件a)硫乙醇酸盐流体培养基30°C〜35°C培养。b)改良马丁培养基23°C〜

2、28°C培养。注：商购脱水培养基的每一个批号做一次培养基的灵敏度检查；每次制备的培养基应随机取不少于5支，与供试品同时进行无菌检查。4.3.2培养基制备按商购脱水培养基说明配制，培养基的pH值应符合规定，否则必须校正。4.3.3培养基及实验用具灭菌培养基分装后放入立式压力蒸汽火菌器屮火菌(115°C±1°C下火菌30min)o实验用具根据需要采用高压蒸汽灭菌(121°C±1°C下灭菌30min)或T燥箱灭菌(160°C下灭菌120min)o4.4菌种金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(CMCC(B)26003)铜绿假单胞菌(Pseu

3、domonasaeruginosa)(CMCC(B)10104)枯草芽砲杆菌(Bacillussubtilis)(CMCC(B)63501)牛:砲梭菌(Clostridiumsporogenes)(CMCC(B)64941)白色念珠菌(Candidaalbicans)(CMCC(F)98001)黑曲霉(Aspergillusniger)(CMCC(F)98003)4.5菌液制备接种金黄色衙萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生砲梭菌的新鲜培养物至硫乙醉酸盐流体培养基屮，30°C〜35°C培养18小时〜24

4、小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23〜28C培养24〜48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜血培养基上，23〜28°C培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将砲了洗脱。然后，用适宜的方法吸出孑包了悬液至无菌试管内，用含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含砲子数小于100cfu的孑包子悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存

5、在2〜8°C可在24小时内使用。黑曲霉孑包子悬液可保存在2〜&C,在验证过的贮存期内使用。4.6稀释液、冲洗液及英制备方法4.6.10.1%蛋白月东水溶液取蛋白月东l.Og,加水1000ml，微温溶解，滤清,调节pH值至7.1±0.2,分装，火菌。4.6.2pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g,蛋白丿冻l.Og,加水1000ml,微温溶解，滤清，分装，灭菌。根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液的火菌丽或火菌后加入表血活性剂或中和剂等。4.7

6、方法验证试验当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若该产品的组分或原检验条件发牛改变时，检查方法应重新验证。验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。菌种及菌液制备除大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102)夕卜，金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌、牛•砲梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。薄膜过滤法取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗,在最麻一次的冲洗液中加入小于100cfu的试

7、验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装冇同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3〜5天，各试验菌同法操作。肓接接种法取符合肓接接种法培养基用最要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于100cfu的金黄色衙萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽他杆菌、生他梭菌各2管，取符合直接接种法培养基用最要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其屮1管接入毎支培养基规定量的供试品量，另1管作为対照，按置规定的温度培养3〜5天。结果判断与对照管比较，如含供试品各容

8、器中的试验菌均牛长良好，则说明供试品的该检验最在该检验条件下无抑菌