双缩脲法测定蛋白质的浓度

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1、双缩脲法测定蛋白质的浓度N端C端相关知识目前常用的有四种经典方法：定氮法：灵敏度0.2~1.0mg双缩尿法（Biuret法）：1~2mgFolin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg紫外吸收法：5μg考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg双缩脲加热＋NH322H－1800双缩脲22222双缩脲反应:碱性环境H2OO=CC=OHNNHR-CHCH-RO=CCuC=OHNNHR-CHCH-RH2O紫色络合物双缩脲试剂蛋白质含有两个以上的肽键（与双缩脲中肽键相似），因此有双缩脲反应。比色分析法溶液的颜色和光的选择吸取、光的吸收定律

2、：T%与A或EA＝εCL一、实验目的掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和方法。学会使用721或7220型分光光度计并了解仪器的基本结构。二、实验原理蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540－560毫微米下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。除－CONH－有此反应外，－CONH2－，－CH2－NH2，－CS－NH

3、2等亦有此反应。三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器吸量管（1毫升，2毫升，5毫升）、试管及试管架、721或7220型分光光度计。（二）材料1． 标准蛋白溶液(2~5mg/ml)、未知液（三）试剂1．双缩脲试剂　溶解0.175克硫酸铜（CuSO4.5H2O）溶于15ml蒸馏水，置于100ml容量瓶中，加入30ml冰冷的蒸馏水和20ml饱和氢氧化钠溶液，摇匀，室温放置1~2h，再加蒸馏水对刻度，摇匀备用。四、实验操作步骤（一） 绘制标准曲线（二）未知样品蛋白质浓度的测定1．取12支试管6支分别加入0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0毫升的

4、标准6支分别加入1毫升不同稀释浓度的待测液（两两相同）。2.分别加水补足到2毫升。3.分别加入4毫升双缩脲试剂在室温下放置30分钟。4.在540毫微米波长下7220型分光光度计比色、读数，记录各管A值。．五、实验结果与讨论前6管每管蛋白的含量为横坐标绘制标准曲线。待测液中选择吸光值在标准曲线范围内的作为计算基础。求出待测液蛋白含量是？单位mg/ml