苦木成分研究和质量评价初步探究

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1、苦木成分研究和质量评价初步探究［摘要］建立RP-HPLC同时测定苦木中4个生物碱与1个黄酮成分含量的方法，并进行多批次药材成分分析，为苦木质量评价提供依据。采用KromasilC18色谱柱(4.6mmX250mm,5um),流动相为乙1%磷酸，梯度洗脱,流速1.0mL•min-1,检测波长254nmo4个生物碱苦木碱L,苦木碱苦木碱F,苦木碱D和黄酮高丽槐素的标准曲线及线性范围依次为Y=6525.6X+37.25(0.009〜1.780ug,r=0.9968),Y=3662.3X+41.55(0

2、.005〜0.920ug,r=0.9995),Y=3763.1X+146.87(0.015〜3.060ug,r=0.9990),Y=2174.1X+21.52(0.003-0.620ug,r=0.9995),Y=276.25X+7.65(0.010〜1.960ug,r=0.9989),平均加样回收率在98.02%〜101.8%,RSD%在1.2%〜2.8%,重复性及精密度良好。经过系统的方法学考察，该法简便，准确，可用于苦木药材的质量分析及控制。［关键词］苦木；B-咔巴咻类生物碱；铁屎米-6-酮

3、类生物碱；二氢异黄酮；RP-HPLC苦木为我国南方地区常用中药，为苦木科苦树属植物Picrasmaquassioides(D.Don)Benn.的干燥枝和叶，性寒，味苦，有清热解毒，祛湿的功效，用于风热感冒，咽喉肿痛，湿热泻痢，湿疹，疮疗，蛇虫咬伤［1］。化学成分研究表明，苦木中主要含有生物碱类，内酯类，黄酮类等化学成分[2-6],其中生物碱类成分主要为铁屎米-6-酮型及B-咔巴咻型。《中国药典》2010年版（一部）收载苦木的质量标准为性状鉴别，显微鉴别及生物碱薄层色谱鉴别，无含量测定项。苦木及

4、含苦木制剂的质量分析报道多为HPLC测定其中铁屎米酮型生物碱的含量[7-10],而对B-咔巴咻型生物碱及黄酮类成分的质量控制尚鲜见报道。为有效控制苦木质量提供可靠的方法，本研究建立RP-HPLC同时测定苦木中2类生物碱（B-咔巴咻型生物碱，包括苦木碱L,苦木碱B；铁屎米-6-酮型生物碱，包括苦木碱F,苦木碱D）及黄酮类（高丽槐素）含量，并进行多批次样品中上述成分含量测定,以期为苦木药材及其制剂的质量控制标准的再提高提供可资借鉴的基础研究资料。1材料大连依利特P230高效液相色谱仪，配置紫外检测器

5、及EC2000色谱工作站（大连伊利特分析仪器有限公司）；AT-330色谱柱恒温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；Sartorius电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。液相用乙睛为色谱纯（美国Honeywell）,水为超纯水，其他试剂均为国产分析纯（汕头市光华化学厂有限公司）。苦木碱L（1-hydroxymethyl-3-carboline,1）,苦木碱B（1-methoxicabony-0-carboline,2）,苦木碱F(4-methoxy-5-hydroxy-canthin-6-on

6、e,3),苦木碱D(4,5-dimethoxy-canthin-6-one,4),高丽槐素(maackiain，5)均为自制，经光谱学鉴定结构，色谱法检测其纯度均为98%以上。苦木测试样品共10批，经广州中医药大学药用植物学教研室潘超美教授鉴定为苦木科苦树属植物苦木P.quassioides的干燥枝和叶，凭证标本现保存于广州中医药大学临床药理研究所。2方法与结果2.1色谱条件及系统适应性KromasilC18色谱柱(4.6mmX250mm,5um)；流动相为乙睛(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗

7、脱(0-22min,18%〜25%A；22〜30min,25%〜40%A；30〜60min,40%〜45%A)；流速1.0niL•min-1；检测波长254nm。对照品和样品进样量均为15uL,色谱图见图1。理论塔板数苦木碱L和B不低于8000,苦木碱F和苦木碱D不低于1万，高丽槐素不低于5000o2.2对照品溶液的制备精密称取对照品1〜5各适量，用甲醇充分溶解并定容，即得混合对照品储备液，其中1〜5的质量浓度分别为88.8,46.0,145.2,31.2,98.0mg•L-1。2.3苦木供试品

8、溶液的制备取干燥至恒重的苦木粉末约1.0g,精密称定，加95%乙醇50mL,超声提取2次，每次15min,提取液过滤，滤液减压回收溶剂，残渣用甲醇溶解并定容至25mL,摇匀，进样前过0.45um微孔滤膜。2.4线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液0.1,1,5,10,15,20uL,进样测定，以峰面积积分值(Y)对进样质量(X)进行线性回归，得回归方程，结果见表1。2.5精密度试验精密吸取混合对照品溶液连续进样5次，5个目标成分的峰面积RSD(n=5)在0.7%〜1.2%,表明仪器精密度良好。