人教版教学课件1.2基因工程的基本操作顺序

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1、1.2基因工程的基本操作程序原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子，内含子能转录为信使RNA编码区上游编码区下游内含子外显子一个基因含有多个外显子和内含子基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取主要是编码蛋白质的基因初始目的基因的来源从生物中直接分离人工合成1、从基

2、因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因文库基因组文库部分基因文库(CDNA文库)基因组文库：基因文库中包含了一种生物所有的基因部分基因文库：基因文库中包含了一种生物的一部分基因某生物体内全部DNA许多DNA片段受体菌群体限制酶与运载体连接导入基因组文库某种生物某个时期的mRNAcDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入部分基因文库（cDNA文库）2、利用PCR技术扩增目的基因聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

3、条件：已知序列的DNA模板、引物、热稳定DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸原理：DNA复制过程：热解旋（90℃－95℃）→引物与单链互补结合（55℃－60℃）→DNA聚合酶作用下延伸（70℃－75℃）循环变性退火延伸3、通过DNA合成仪直接人工合成条件：基因比较小且已知其序列二.基因表达载体的构建-----------核心基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端复制原点+启动子+目的基因+终止子+标志基因基因表达载体的组成三、将目的基因导入受体细胞

4、转化常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。三、将目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞----农杆菌转化法2.将目的基因导入动物细胞显微注射技术提纯基因表达载体体外显微注射入受精卵受精卵培养一段时间移入输卵管或子宫内具有新性状的个体3、将目的基因导入微生物细胞①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少②方法：用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子四、目的基因的检测与鉴定检测—鉴定——①检测转基因

5、生物染色体的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等DNA分子杂交分子杂交（注意与上不同之处）抗原—抗体杂交基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、化学方法人工合成复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、Ca2+处理法DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原—抗体杂交技术分子检测外的个

6、体水平鉴定巩固练习:1.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因的主要作用是()A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性B.有利于对目的基因是否导入进行检测C.增加质粒分子的分子量D.便于与外源基因连接2.在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于()A.目的基因的提取和导入B.目的基因的提取和检测C.目的基因与载体的结合和导入D.目的基因的提取与载体结合BD以下说法正确的是（）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基

7、因连接D、基因控制的性状都能在后代表现出来C4.1976年,美国的科学家首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌,并获得了表达,此文中的表达是指该基因在大肠杆菌()A.能进行DNA复制B.能传递给细菌后代C.能合成生长抑制素释放因子D.能合成人的生长素C5.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的,在基因操作的基本步骤中,不进行减基互补配对的步骤是()A.人工合成目的基因B.目的基因与载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测和表达C有关基因工程的叙述正确的是（）A、限制酶只在获得目的基因时才用B、重组质粒的形

8、成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D