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时间:2019-11-18
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1、纤维素的测定------比色法纤维素由葡萄糖基组成,它是组成植物细胞壁的基本成分。其含量的多少关系到植物的机械组织是否发达,作物抗倒伏、抗病虫害的能力是否较强,并且影响到粮食作物、纤维作物和蔬菜作物等的产量和品质。在各种粮食中纤维素的含量各不相同,与籽粒皮层厚薄成正比。同种粮食中,原粮纤维素维素含量最高,加工粗加工精度越高,纤维素含呈越少,如小麦标准粉约O.7%.稻谷约9.0%,糙米约1.0%,白米约04%。因此,根据纤维素的含量的测定,可以判别籽粒皮层的厚薄,粮食加工精度高低和营养价值评估。纤维素的测定方法有酸碱醇醚法、酸性洗涤剂法、碘量法及比色
2、法。第一个是国标法,但比较繁琐,后者操作比较简单。一、方法原理纤维素是由葡萄糖基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖。然后在浓硫酸作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物。利用蒽酮试剂与糠醛类化合物的蓝绿色反应即可进行比色测定。二、仪器和试剂1.主要仪器恒温水浴、冰罐、电炉、玻璃坩埚、漏斗、定时钟、分光光度计等。2.试剂60%H2SO4溶液、浓H2SO4。2%蒽酮试剂:2g蒽酮溶解于100rnl乙酸乙酯中,贮置于棕色试剂瓶中。纤维素标准液:准确称取100mg纯纤维素,放入100Inl量瓶中,将量瓶放入冰浴中,然后加冷的60%H2SO460—70m
3、l,在冷的条件下消化处理20—30min,然后用60%H2SO4稀释至刻度,摇匀。吸取此液5.0ml放入另一50ml量瓶中,将量瓶放入冰浴中,加蒸馏水稀释刻度,则每毫升含100μg纤维素。三、操作步骤1.绘制纤维素标准曲线(1)取6支小试管,分别放入0、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00ml纤维素标准液。然后分别加入2.00、1.60、1.20、0.80、0.40、0ml蒸馏,摇匀。则每管依次含纤维素0、40、80、120、160、200μg。(2)向每管加0.5ml%蒽酮试剂,再沿管壁加5.0ml浓H2SO4,塞上塞子,微微摇动,促
4、使乙酸乙酯水解,当管内出现蒽酮絮状物时,再剧烈摇动促进蒽酮溶解,然后立即放入沸水浴中加热10min,取出冷却。(3)在分光光度计上620urn波长下比色,测出各管消光值。(4)以所测得的消光值为纵坐标,以纤维素含量为横坐标,绘制纤维素标准曲线。2.样品的测定(1)准确称取风干的样品100mg,放入100rnl量瓶中,将量瓶放入冰浴中,加冷的60%H2SO4。60—70ml,在冷的条件下消化处理半小时,然后用60%H2SO4。稀释至刻度,摇匀,用玻璃坩埚漏斗过滤。(2)吸取上述滤液5.0ml,放入5ml量瓶中,将量瓶置于冰浴中,加蒸馏水释至刻度,摇匀
5、。(3)吸取上液2.0ml,加0.5ml2%蒽酮试剂,再沿管壁加5.0ml浓H2SO4,盖上塞子,以后操作同纤维素标准液,测出样品在620urn波长下的消光值。四、结果计算以样品测定消光值,在标准曲线上查出相应的纤维素含量,然后均按下式计算样品中纤维素含量:X=A*10-6*C*100B式中:A——在标准曲线上查得的纤维素含量值(B——样品重(g)-6C——样品稀释倍数X——样品中纤维素含量(%)五、说明1.此法需用纯纤维素样品作标准曲线。μg);2.纤维素加60%H2SO4时,一定要在冰浴条件下进行。参考文献:作物品质分析农业出版社主编:牛森
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