《学科基础实验》实验指导书

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1、或汤工程专A《学科基础实验》指导书张如新、刘静霆编邵阳学院生物与化学工程系2010年03月实验一不同因素对酶活性的影响—、目的：加深对酶的性质的认识。二、内容：木实验由温度对晦的活力的影响；pH对酶活力的影响；IW的激活剂及抑制剂；酶的专一性四组实验组成。（一）温度对酶活力的影响1.原理：酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37〜40°C,植物酶的最适温度为50〜60°C。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100°C,其活性并无明显改变，但在100°C的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。

2、2.器材：（1）试管及试管架。（2）恒温水浴。（3）冰浴。（4）沸水浴。3.试剂和材料：（1）0.2%淀粉的0.3%氯化钠溶液150毫升需新鲜配制。⑵稀释50倍的唾液50毫升用蒸谓水漱口，以清除食物残渣、再含一口蒸他水，半分钟后使英流入量简并稀释50倍，（稀释倍数可根据各人唾液淀粉酶活性调整）混匀备用。（3）碘比钾一碘溶液50毫升将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升水中。使用询稀释10倍。4.操作方法：淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度卜，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现

3、的颜色來判断。取3支试管，编号后按下表加入试剂:管号123淀粉1<51.51.5猶甘垂液(*升》11—煮浣过的秸算唾液(進升)一一1摇匀后，将1号、3号两试管放入37°Cffi温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后取出，(将2号管内液体分为两半)用碘化钾一碘溶液來检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果，将二号管剩下的一半溶液放入37°C水浴屮继续保温10分钟后，再用碘液实验，结果如何？(-)pH对酶活性的影响1.原理：酶的活力受环境pH的影响极为显著；不同酶的最适pH值不同。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。2•器材：(1)、试管及试

4、管架2)、吸管(3)、滴管(4)、50毫升锥形瓶(5)、恒温水浴3•试剂和材料：(1)、新配制的溶于0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液250毫升(2)、稀释50倍的新鲜唾液100毫升(3)、0.2摩尔/升磷酸氢二钠溶液600毫升(4)、0.1摩尔柠檬酸溶液400毫升(5)、碘化钾一碘溶液50毫升(6)、pH试纸：pH=5、pH=5.8、pH=6.8、PH=8四种4.操作方法：取4个标有号码的50毫升锥形瓶。用吸管按下表添加0.2摩尔/升磷酸氢二钠溶液和0」摩尔/升柠檬酸溶液以制备pH5.0一8.0的四种缓冲液。锥形瓶号码0.2摩尔/升磷酸氢二钠(毫升)0」摩尔/升柠檬酸(毫升)pH值15.154

5、.855.026.053.955.837.722.286.849.720.288.0从四个锥形瓶中各取缓冲液3毫升，分别注入4支带冇号码的试管中，随后于每个试管屮添加0.5%淀粉溶液2毫升和稀释50倍的唾液2毫升。向各试管小加入稀释唾液的时间间隔各为1分钟。将各试管内容物混匀，并依次置于37°C恒温水浴中保温。第四管加入唾液2分钟后，每隔I分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴碘化钾一碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加1—2滴碘化钾一碘溶液。添加碘化钾一碘溶液的时间间隔，从第一管起，亦均为1分钟。观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性

6、的影响。(三)唾液淀粉酶的活化和抑制1・原理：酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离了为其抑制剂。2.器材:1).恒温水浴(2)、试管及试管架3.试剂和材料：⑴、0.1%淀扮溶液150毫升(2)、稀释50倍的新鲜睡•液150毫升(3)、1%氯化钠溶液50毫升(4)、1%硫酸铜鎔液50毫升(5)、1%硫酸钠溶液50毫升(6)、碘化钾一碘溶液100毫升4.操作方法：管号12340・1%淀粉谗液(毫升)1.5i1.5K51.5稀释屢液(亳升〉0,5I0・50・50.5】％窥酸铜溶液(毫升)0.6一—】％氯化创落一0.5——酸IA溶液(毫升》—■0.5亠蒸钳水(毫升〉一0.5

7、水浴、保SU0分钟注f2-32—32—3«*注保僵时伺可根据各人魅液淀粉酵活力调整•解释结杲，说明本实验第3管的意义。(四)酶的专一性1.原理：酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉IW水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解，蔗糖酶能催化蔗糖水解产牛还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解，用Benedict