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1、西南政法大学司法鉴定中心文件编号FSC07—TD—M-2作业指导书页号第1页共9页版次第-•版第1次修改标题STR与性别位点基因型检测审核人王旭东批准人易旻发布日期2008年11月］8日1.目的通过对D3S1358等STR位点的基因型检测，进行亲子鉴定和个体识别。2.适用范围木作业指导书适用于法医物证学实验室对刑事、民事以及非诉讼案件中人体血液（斑）、羊水、带毛囊毛发、混合斑、精斑、组织等生物学检材的DNA基因型检验以及性别位点的检测。3.职责中心主任批准具有法医物证鉴定资格的鉴定人履行此项工作。4.试剂本法所用试剂
2、为分析纯，在有效期内使用；使用pH试纸测定溶液的pH值。4.1l（）mg/m1蛋白酶K：lmg蛋白酶K溶于10（）U1双蒸水中，每管30u1分装，冰箱冻存。4.2Imol/LDTT：称取0.77gDTT,加入5ml双蒸水,溶解后加入50P1lmol/1NaAc（pH5.2）,混匀。4.3Chelex100（50-100mesh）：5gChelex100加双蒸水至50ml,检查pH为9-11。4.40.5mol/LEDTA：于800ml双蒸水屮加入186.lgNa2EDTA・2H2O,在磁力搅拌器上搅拌溶解（可加20g
3、NaOH助溶，此时pH=8.0±0.2）o检查pH,用水定容至1L。4.5Powerplex16System扩增试剂盒（Promega公司）：冰箱冻存。4.6GeneScan-600[ILS]（Promega公司）：2-6°C保存。4.7POP-4（ABI公司）：2-6°CWo5.设备仪器5」310型遗传分析仪。5.29700型PCR扩增仪。5.3振荡器。5.4台式高速离心机。5.5恒温干燥箱。5.6计算机。6.原理从生物学检材中抽提DNA,针对D3S1358,TH01,D21S11,D18S51,PentaE,D5
4、S818,D13S317,D7S820,D16S539,CSFIPO,PentaD,vWA,D8S1179,TPOX,FGA等STR位点和性别位点Amelogenin进行复合PCR扩增，将扩增产物进行电泳分析，确立基因型。7.程序7」DNA提取7」」从血样中提取DNA：（1）在1.5ml离心管中加lml双蒸水，然后加入3u1全血（约9mm2血斑），小心混匀;西南政法大学司法鉴定中心文件编号FSC07—TD—M-2作业指导书页号第2页共9页版次第-•版第1次修改标题STR与性别位点基因型检测审核人王旭东批准人易旻发布日
5、期2008年11月］8日室温保温3()min,间歇振荡；(2)10000-15000r/min离心2-3min；小心移去上清液。若样站为血斑，则保留载体；(3)沉淀中加入10%Chelex100(50-100mesh)200u1;56°C保温30niin；(4)高速振荡5-10sec;100°C8min；(5)高速振荡5-IOsec;10000-15000r/min离心2-3min,取上清液用于PCR扩增;2-8°C保存或冻存剩余DNAo7」.2从毛发中提取DNA：(1)用三蒸水清洗毛发；剪取毛根部分；放入1.5ml
6、Eppendorf管屮；(2)加入200U110%Chelex100(50-100mesh)及2卩110mg/mlPK(蛋白酶K),56°C保温6-8hr或过夜；(3)高速振荡5-10sec；沸水煮8min(注意毛发应浸没于Chelex液)；(4)高速振荡5-10scc；10000-15000r/min离心2-3min；取上清液用于扩增反应，2-8°C保存或冻存剩余DNAo7」.3从口腔刮拭物样本中提取DNA:(1)用牙签刮拭口腔粘膜,将其放入1.5ml离心管内,加入200ul10%Chelex(50-100mesh
7、)；搅动，使细胞脱落；(2)56°C保温15-30min；(3)高速振荡5-10sec；100°C8min；(4)高速振荡5-10sec,10000-15000r/min离心2-3min；(5)取上清液用于扩增反应；2-8°C保存或冻存剩余DNAo7.1.4从唾液斑屮提取DNA：(1)取9mm2唾液斑放入1.5ml离心管中，加1ml三蒸水于室温浸泡30min；(2)用牙签搅动使载体细胞脱离载体，去除载体；10000-15000r/min离心lmin;(3)去上清仅留50U1,用无菌吸头吹打沉淀：加10%Chelex1
8、00(50-100mesh)至200u1,56°C保温15-30min;(4)肓速振荡5-10sec；100°C8min;(5)高速振荡5-10scc,10000-15000r/min离心2-3min；取上清液用于扩增反应；28C保存或冻存剩余DNA.7」.5从精液中提取DNA:(1)取3ul精液放入1.5ml离心管内,加入200u110%Ch
